一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
技术原理 实时荧光定量PCR的基本原理是利用DNA聚合酶在PCR过程中合成新DNA链的特性，结合一种荧光标记的探针或染料，通过实时监测荧光信号的增加来测量PCR反应的进行程度。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。实时荧光定量PCR具有多项优点，包括高灵敏度、高特异...
RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1.1、使用逆转录酶和特定引物将RNA样品反转录成cDNA。 1.2、该步骤将RNA模板转化为更稳定且可扩增的DNA形式。 1.3、反转录过程中使用特定引物。 2、PCR扩增: 2.1、使用特定引物对cDNA进行PCR扩增,这些引物环绕目标区域。 2.2、PCR是一个循环过程,呈指数级扩增DNA模板的数量。
一、rt-qpcr实验原理 rt-qpcr是一种结合了逆转录和实时荧光定量PCR技术的方法，用于对RNA分子进行定量检测。其原理主要包括三个方面：逆转录、PCR扩增和实时荧光定量检测。1. 逆转录 rt-qpcr实验首先需要将RNA转录为cDNA，这是通过逆转录酶（Reverse Transcriptase）催化的反应来实现的。逆转录酶可以将RNA模板转录成...
RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成(图1、表1)。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中,逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成,使用不同的优化...
RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成(图1、表1)。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中,逆转录和PCR扩增过程是在...
图 3. 染料法和探针法 qPCR 原理流程图[12]。4 逆转录 PCR (RT-PCR)逆转录 PCR(Reverse transcription PCR, RT-PCR) 可使用 RNA 作为模板生成互补 DNA (cDNA)。利用逆转录酶，产生 cDNA 的单链拷贝。然后，这可以通过 DNA 聚合酶扩增，产生双链 cDNA，进入基于 PCR 的标准扩增过程 (图 4A)。该技术可...