RT-qPCR可是在分子生物学研究中相当重要的技术,而准确的计算方法对于得出可靠结果那是起着决定性作用的。 1. 标准曲线法(绝对定量)。 原理:我们要明白绝对定量的目的是确定样本中目标基因的实际拷贝数。通过构建已知浓度的标准品梯度,进行RT-qPCR扩增,以标准品浓度的对数值为横坐标,以对应的Ct值(Cycle threshold,...
RT-QPCR相对定量计算方法, 视频播放量 230、弹幕量 0、点赞数 5、投硬币枚数 0、收藏人数 8、转发人数 1, 视频作者 亲小荳, 作者简介 没什么说的,相关视频:基因拷贝数的计算,标准曲线绘制和QPCR绝对定量,千万不要用DeepSeek写论文!!!,Deepseek如何助力学术论文写作
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针，当与扩增的 DNA 或 RNA 分子结合时会发出信号，从而可以对目标序列进行量化。荧光定量PCR其本质是通过荧光探针或荧光DNA结合染料和实时荧光定量PCR仪器对PCR扩增产物进行检测和定量，仪器在PCR...
常用的DNA提取方法包括硅质吸附法、酚-氯仿法、酶水解法等。根据不同的样本类型和实验需求,选择合适的提取方法。 2.荧光标记:在PCR反应体系中加入荧光标记的探针或者荧光染料。荧光标记是rtqPCR技术的关键步骤,探针和染料的选取对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。SYBR Green是一种通用的染料,可与所有dsDNA结...
▲图1:RT-qPCR基本流程 1、实验设计 正确的实验设计是任何基因表达研究的关键。由于mRNA转录对与研究过程无关的外部刺激敏感,因此严格控制和设计实验条件的工作是十分重要的。其中包括了确定实验程序、对照组、重复组的类型和数量、实验条件以及各组内的样品处理方法等,这些对于最小化变异性至关重要(表1)。
(1)猪传染性胃肠炎RT-qPCR检测方法基于实时荧光定量PCR技术,该技术利用荧光标记的寡核苷酸探针和PCR技术相结合,实现对目标DNA或RNA的定量检测。该方法具有较高的灵敏度和特异性,能够在病毒含量极低的样品中检测到病毒核酸,灵敏度可达10-20fg/μl。例如,在猪传染性胃肠炎病毒检测中,通过优化反应条件和引物探针设计,...
一、RT-qPCR检测方法 RT-qPCR是一种基于实时荧光定量PCR技术的检测方法,可快速、准确地检测出猪传染性胃肠炎病毒。该方法主要步骤包括:RNA提取、反转录、PCR扩增和数据分析。 1. RNA提取 将待测样品(如粪便、肠内容物等)加入适量裂解液,充分混合后,按照RNA提取试剂盒说明书操作,提取出总RNA。 2. 反转录 将提取...
下面从各个步骤对MIQE指南进行讲解,RT-qPCR通常分为以下五个步骤:1. 实验设计;2. 样本采集、处理和制备;3. 核酸质量控制;4. 反转录;5. qPCR;6.内参基因的选择;7. 实验重复性;8. 数据分析;9. 术语统一。下面,我们看下每一步所需信息。 1. 实验设计 ...
一种用于检测膀胱癌的rt-qpcr检测方法,其包括的步骤如下: (1)取30ml尿液离心(其中转速2000rpm,时间10分钟,温度4℃),收集上清液放入另一试管; (2)取5ml上清液加入1mlexoquick的exosome提取液,在4℃孵化12小时,混合液离心后(转速为1500g,时间为30分钟)使得exosome沉淀在试管底,去除上液后用100ul不含rnaase(核糖...
我在这里跟大家分享一下自己的经验,最常用,最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法,该法最最简单的说就是: 首先将一次实验的所有基因Ct值整理好,之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值,得到的数就是△Ct;换成公式就是:△Ct=Ct(目的基因)-Ct(内参基因); ...