RT-QPCR相对定量计算方法, 视频播放量 161、弹幕量 0、点赞数 3、投硬币枚数 0、收藏人数 7、转发人数 0, 视频作者 亲小荳, 作者简介 没什么说的,相关视频:deepseek接入excel教程详细步骤方法,与excel结合内嵌链接方法 deepseek与excel结合使用,excel教程从零开始,Deep
一、RT-qPCR检测方法 RT-qPCR是一种基于实时荧光定量PCR技术的检测方法,可快速、准确地检测出猪传染性胃肠炎病毒。该方法主要步骤包括:RNA提取、反转录、PCR扩增和数据分析。 1. RNA提取 将待测样品(如粪便、肠内容物等)加入适量裂解液,充分混合后,按照RNA提取试剂盒说明书操作,提取出总RNA。 2. 反转录 将提取...
常用的DNA提取方法包括硅质吸附法、酚-氯仿法、酶水解法等。根据不同的样本类型和实验需求,选择合适的提取方法。 2.荧光标记:在PCR反应体系中加入荧光标记的探针或者荧光染料。荧光标记是rtqPCR技术的关键步骤,探针和染料的选取对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。SYBR Green是一种通用的染料,可与所有dsDNA结...
我在这里跟大家分享一下自己的经验,最常用,最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法,该法最最简单的说就是: 首先将一次实验的所有基因Ct值整理好,之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值,得到的数就是△Ct;换成公式就是:△Ct=Ct(目的基因)-Ct(内参基因); ...
【实验】qPCR数据分析,作图 植物百科 8632 2 【科研助手】RT-qPCR数据分析—— 一点就会 导师看了惊呼内行!!! 医学小朱 8776 3 RT-qPCR操作 kyk2021 3093 0 【科研绘图】RT-qPCR科研绘图——从原始数据到出图vip丝滑一条龙服务 医学小朱 4235 4 【组会录屏】RT-qPCR原理与注意事项 遛呀遛呀 3696...
RT-qPCR引物应跨内含子设计,这是由于RT-qPCR以cDNA为模板,扩增片段较小。若不跨内含子设计,则扩增片段可能在同一个外显子内。此时,无论是cDNA还是基因组DNA均能扩增同一片段,导致误差。若跨内含子,则只有cDNA能够扩增,这样就避免了基因组DNA的污染。
▲图1:RT-qPCR基本流程 1、实验设计 正确的实验设计是任何基因表达研究的关键。由于mRNA转录对与研究过程无关的外部刺激敏感,因此严格控制和设计实验条件的工作是十分重要的。其中包括了确定实验程序、对照组、重复组的类型和数量、实验条件以及各组内的样品处理方法等,这些对于最小化变异性至关重要(表1)。
那怎么实现这一点呢? 一定范围内,cDNA每多稀释一倍,Ct值增加1。比如cDNA稀释5倍的Ct值是28,那稀释10倍的Ct值在29。通过预实验,以此原理来调整稀释倍数,也可以梯度稀释cDNA得到的Ct值来确定一个稀释倍数。这还是比较麻烦的,常见的cDNA稀释倍数在3-10倍之间。不稀释的cDNA不要超过qPCR体积的1/10。 展开更多...
师姐详解从PCR到qPCR实验流程(详解) 实时定量PCR(RT-qPCR)是一种利用荧光化学物质在每个聚合酶链式反应(PCR)循环后测量产物总量的方法,广泛应用于特定DNA序列的定量分析。以下是RT-qPCR的实验操作流程: 🔬 实验原理:Real-time PCR通过荧光信号实时监测PCR进程。在指数扩增阶段,模板的Ct值与起始拷贝数之间存在线性...