RT-qPCR是一种对特定DNA进行定量分析的方法，其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行荧光定量PCR，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性...
实时定量PCR(RT-qPCR)检测 一.RT-qPCR 基本原理和概念 实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集...
逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)将逆转录反应(RT)与实时荧光聚合酶链式反应(qPCR)相结合,是当下病原学分子诊断的常用方法。RT-qPCR以RNA为起始材料,在RT阶段,运用逆转录酶以RNA为模板形成互补的DNA链(cDNA)。随后以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中,其中包括病原体检测、基...
RT-qPCR 对照 一个逆转录阴性对照(-RT对照)应该包括在所有的 RT-qPCR 的实验中,以检测 DNA 污染(如基因组 DNA 或来自之前反应的 PCR 产物)。这一对照包含除逆转录酶之外的所有反应组分。由于该对照不会发生逆转录,因此如果观察到 PCR 扩增,则极有可能来自 DNA 的污染。
RT-qPCR包括三大步骤:RNA的提取与质量检测、逆转录成cDNA、以及实时荧光定量PCR实验。通过RT-qPCR实验,可以合成cDNA探针、获取目的基因、以及分析基因的转录水平。 RNA的提取与质量检测 从细胞、组织等样本中提取出RNA后,需要对提取的RNA的纯度、浓度、以及完整性进行评估,质检达标后才能进行后续的实验。一般需要通过紫外...
qPCR:实时定量聚合酶链式反应(qPCR)是一种实时检测PCR过程中荧光信号变化的技术,可以定量检测目标分子的含量。qPCR通过在反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中实时监测荧光信号的变化,从而计算出目标分子的拷贝数。qPCR技术主要用于DNA或cDNA的定量分析,如基因表达分析、病毒载量检测等。
实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。在实时荧光定量PCR (qPCR)中,反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征...
RT-qPCR 操作简单,检测周期短,通常可以在 1-2 天内获得结果。NGS 流程复杂,检测周期较长,通常需要 5-7 天。 (3)适用于常见突变筛查: RT-qPCR 对于常见 EGFR 突变(如外显子 19 缺失和外显子 21 点突变)的检测灵敏度和...
RT-qPCR检测的..实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,简称RT-qPCR)是一种在PCR实验中,以RNA为起始材料的检测技术。此方