RT-qPCR反应由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成，技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物，重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百...
实时荧光定量PCR(Real-time PCR,Quantitative Real-time PCR,qPCR),即第二代PCR技术,是指在整个扩增的过程中,引入了荧光染料或者荧光基团,随着DNA数量的成倍增加,反应体系中的荧光信号也会增强。 在整个PCR反应过程中,借助对荧光信号的强弱进行检测实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待...
microRNA(miRNA)是一类长度在 22nt 左右的小 RNA 分子,它并不编码 蛋白质,因此 miRNA 与 siRNA 和 circRNA 等小 RNA 分子一样,也是一种非编 码 RNA。 6miRNA QPCR 检测 在做qPCR的过程中,常常会出现各种问题,让初学者一筹莫展,要debug,首先要明白bug是怎么出现的,才能对症下药。 7流式检测细胞周期 PI法...
RT-PCR 就是逆转录 PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录 PCR (reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应 (PCR) 的一种广泛应用的变形。 在RT-PCR 中,一条RNA链被逆转录成为互补 DNA,再以此为模板通过 PCR 进行 DNA...
qPCR实质上是一种PCR扩增反应，但它与普通PCR有所不同。普通PCR是将的得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过核酸染料染色并借助紫外凝胶成像仪进行观察，最后通过终产物进行定性或者半定量分析；qPCR是在反应体系中引入荧光基团（染料或者探针），进而对qPCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应的过程，结合相应的qPCR仪...
qPCR探针设计的一般原则有这5个,看看你都了解吗?#qPCR#科研实验 205 -- 0:20 App 引物退火后不能连接到载体上是什么问题?#PCR 213 -- 0:37 App 举例说明如何测定引物的OD值,看完视频看看你学会了吗?#PCR#引物设计 298 -- 0:47 App 怎么样操作可以尽量避免血清沉淀的出现?这很基础的知识,可能你都不...
翌圣生物作为研发qPCR试剂的资深厂家,匠心研发了一款高性能qPCR预混液——Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix,可以一次性解决上述实验烦恼。其中Universal ROX替代了传统ROX,弥补不同仪器平台的光程差,实现了适合所有qPCR仪器。另外,产品采用抗体法修饰,同时配方添加了基因扩增的促进因子,产品的扩...
QPCR 一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA...
pcr 常用就是扩基因，提完rna后反转啊，那你扩来基因用做什么就需要你来看了。菌落PCR，也是扩，放大数目，好验证。qPCR是荧光染料，做定量，一般是看表达，就是基因的表达情况，基因层面 rtPCR是半定量，相对上面的定量来说没有完全量化，相当于是质化，也能看出问题 western 是做蛋白的 ...
在RT-qPCR 实验中,如何避免漏加、错加试剂? 做Western blot实验时,什么样的操作顺序才最合理? 怎么从文献中快速提炼实验套路、挖掘实验结果关键信息,快速复现SCI? 实验试剂琳琅满目怎么快速选到性价比最高的? 是不是光看着这些问题就头大了?但这还只是基础科研的实验操作部分,其他还有课题设计、实验设计、论文写作...