3、微流体毛细管电泳系统(分析 RNA 浓度和完整性) 目前已经有成熟并广泛应用的生物分析仪,如 Agilent 2100、Experion™ 自动电泳工作站等。 此外还可以采用 3`:5` assay(检测提取产物中 GAPDH mRNA 的完整性来代表所有 RNA 的完整性,分析 RNA 完整性)、SPUD assay (分析 PCR 抑制剂)、NRT PCR assay(分析 ...
1) 将要比较的两个样品的BETA-ACTIN 调成一样的亮度,然后就可以直接比较目的基因的亮度了。方法的结果比较直观,但较费事。2) 不进行调平,一个样品里将目的基因和BETA-ACTIN直接比较,用软件就可以做到,然后将不同样品的这个比值进行比较就可以了。方法比较简单,但结果不够直观。1.每个标本都要...
图1 PCR产物检测的琼脂糖凝胶电泳 观察结果: ① 是否有扩增产物。 ②如有拖尾或有几条区带,说明有非特异性扩增。 ③分子量标准电泳后区带是否分开。 ④与分子量标准比较,PCR产物的长度是否正确。 ⑤PCR产物的产量。 ⑥引物二聚体。 RT-PCR检测人β-actin基因表达 扩增产物长度 260 bp 问题及解决方法 无...
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RT-PCR的电泳荧光条带分析 本实验是应用于RT- PCR的电泳荧光条带分析方面。本实验所要研究的核心问题是PCR的结果如何与已知基因的DNA相对比,由此找出PCR扩增子之间的差异和缺失的基因序列,最后确定基因突变类型、位点以及进一步研究其功能的可能性等。 在生物化学中,PCR的意思是聚合酶链式反应,也就是将DNA聚合酶加...
rtpcr,你这跑的是cDNA?参照rna电泳图,两条带对应28s和18s那两个带(理论上应该还有个5s的),...
1RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1ul (浓度10uM/L)pcr mix 10ul (用过biotek的mix,也用过takara 的EX Taq HS)rnafree水 7ul 94℃ 5min94℃ 30...
下面是RNA电泳图片:下面这张是RT产物的电泳图片:A:1)取决于定量PCR的方法,如果用SYBR GREEN,基本上来说就是只是多了荧光燃料而已,如果是用Taqman等方法,那么就是要又标记了荧光的探针。2)PCR产物 9、大小一般是有差异的,普通RT各种大小都有,不过我们通常不想片断太小,以免跑胶不变,在做定量的时候,为了扩增...
图2.3 熔解曲线多峰 4)Tm值:一般正常qPCR产物,大小在100-300bp之间,熔解曲线Tm大多在80℃以上,若Tm<80℃,有可能出现引物二聚体。 如若反复排除仍无法找到原因,建议将qPCR的产物作一次琼脂糖凝胶电泳,看是否在相应扩增条带上有显影(图 2.4,来源:QPCR-如何判断引物设计是否有问题)。
2.请大家帮忙看张PCR电泳结果图,谢谢!(电泳结果图|内参)3.诱变引物是什么啊(引物,诱变,基因,反应体系)4.扩增产物大小不对的问题(扩增产物,细胞株,条带)5.三段PCR扩增产物酶切后直接连接,可行吗(酶切,扩增产物,载体)6.荧光定量PCR的扩增产物长度为何不能太长(扩增产物,荧光定量)7.求RealTime ...