1【题文】目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)进行新冠毒核酸检测,操作流程:从密接者组织中提取RNA→将RNA逆转录为cDNA→PCR扩增cDNA→DNA分子杂交进行核酸检测→通过荧光强度判断是否含有病毒核酸。“核酸检测试剂盒实际上是盛放有几种关键试剂的盒子,比如:特异性的荧光DNA探针(特异性的带荧光的病毒核酸序列)逆转...
RT-PCR 原理与实验操作步骤 RT-PCR 原理与实验操作步骤 关键词:RT-PCR 逆转录酶 reversetranscriptase 聚合酶 链式反应 引物设计 DNA 聚合酶 一、知识背景: 1、基因表达:DNA RNA Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制,如一个蚕丝心蛋白基因 104 个丝心蛋白 mRNA(每个 mRNA 存活 4d,可以合成 105 个丝心...
下面将介绍RT-PCR的操作流程。 首先,准备实验所需的试剂和设备,包括RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、热循环仪等。确保所有试剂和设备都处于干净、无菌状态。 第二步是提取RNA样本。将待检测的样本(如血液、组织等)加入RNA提取试剂盒中,按照试剂盒说明书的指导进行RNA提取。提取后的RNA样本应该是纯净的,...
1. PCR仪 2. PCR管 3. 微量移液器 【操作方法】 一、逆转录 1)逆转录RT反应体系构成: 2)涡旋混匀,42℃反应1小时,95℃加热5分钟,然后置于冰上。 二、PCR扩增 1) PCR反应体系构成 2)将上述反应体系涡旋混匀, 按下列程序运行循环 Step2-4运行30个循环,其中复性温度主要依据引物的不同而不同。
RT-PCR的核心步骤包括从组织或细胞中提取总RNA,并以其中的mRNA作为模板。通过使用Oligo(dT)或随机引物,利用逆转录酶将mRNA反转录成cDNA。然后,以生成的cDNA为模板进行PCR扩增,从而获得目的基因或检测基因表达。 🧪 操作流程 提取RNA:从组织或细胞中提取总RNA,这是RT-PCR的第一步。 逆转录:使用Oligo(dT)或随机...
在进行RT-PCR实验时,务必佩戴口罩和手套,避免其他人员干扰。RT试剂盒从冰箱取出后,需充分解冻并瞬离,然后混匀,放于冰上。为避免漏加或错加试剂,可以使用数字贴纸进行编号。2. 试剂操作 🧼 取用不同试剂时,必须更换枪头,以防止样本之间的交叉污染。逆转录时,PCR仪可提前预热。反应体系配好后,需充分混匀并瞬...
rt-pcr操作流程rt-pcr操作流程如下: 1.RNA提取:从样品(如细胞、组织、血液、唾液等)中提取RNA,可以使用商业RNA提取试剂盒或自制方法。 2.cDNA合成:利用逆转录酶(Reverse Transcriptase)将RNA转录成cDNA(DNA的互补链),可以使用商业RT试剂盒或自制方法。 3.建立标准曲线:制备一系列已知浓度的标准品,用以构建标准...
RT-PCR操作步骤 RT-PCR步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。7. 12000×g，4℃离心...
RT-PCR技术操作流程 简介 RT-PCR是利用反转录酶催化dNTPs聚合成与mRNA模板互补的单链DNA(即cDNA)，以cDNA为模板在PCR反应系统中进行扩增，然后通过琼脂糖凝胶电泳法检测RT-PCR产物，从而间接检测mRNA的方法。工具/原料 PCR仪、台式离心机、低温高速离心机、旋涡混匀器、稳压稳流电泳仪、水平电泳槽、紫外凝胶分析系统等...