1. Total RNA was extracted using a Trizol reagent (Invitrogen). RNA (2 μg) was converted into cDNA using the RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo). QRT-PCR was accomplished using the FastStart Universal SYBR Green Master (Rox) (Roche) in the ABI PRISM® 7300 real-time PCR...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
1.提取RNA:RT-PCR的第一步是从样品中提取RNA。常见的方法包括酚/氯仿提取法和商用RNA提取试剂盒。 2.逆转录:逆转录是将RNA转录成cDNA的过程。逆转录反应需要逆转录酶和引物。在逆转录反应中,RNA被逆转录酶逆转录为单链cDNA。 3.退火:将逆转录产生的单链cDNA进行退火,以得到双链cDNA。退火的温度和时间应根据...
用此类引物仅产生所需要的 cDNA,导致更为特异的 PCR 扩增。 三、 试剂准备 1.RMA 提取试剂 2.第一链 cDNA 合成试剂盒 3.dNTPmix:含 dATP、dCTP、dGTP、dTTP 各 2mM 4.Taq DNA 聚合酶 四、操作步骤 1. 总 RNA 的提取:见相关内容。 2. cDNA 第一链的合成:目前试剂公司有多种 cDNA 第一链试剂盒出售...
在进行RT-PCR实验时,务必佩戴口罩和手套,避免其他人员干扰。RT试剂盒从冰箱取出后,需充分解冻并瞬离,然后混匀,放于冰上。为避免漏加或错加试剂,可以使用数字贴纸进行编号。2. 试剂操作 🧼 取用不同试剂时,必须更换枪头,以防止样本之间的交叉污染。逆转录时,PCR仪可提前预热。反应体系配好后,需充分混匀并瞬...
下面将介绍RT-PCR的操作流程。 首先,准备实验所需的试剂和设备,包括RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、热循环仪等。确保所有试剂和设备都处于干净、无菌状态。 第二步是提取RNA样本。将待检测的样本(如血液、组织等)加入RNA提取试剂盒中,按照试剂盒说明书的指导进行RNA提取。提取后的RNA样本应该是纯净的,...
RT-PCR操作步骤 RT-PCR步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。7. 12000×g，4℃离心...
RT-PCR(逆转录PCR)操作和原理, 视频播放量 14716、弹幕量 0、点赞数 174、投硬币枚数 37、收藏人数 426、转发人数 151, 视频作者 生物使容快乐, 作者简介 小小生物老师一枚~,相关视频:RT-PCR大白话科普～,荧光定量 PCR 原理,高考生物PCR衍生技术专题 | 反向PCR、定点突
生物学小白不容错过~实时荧光定量PCR(Q-PCR)实验全流程(三)8连排上机操作! 1.2万 6 9:10 App PCR仪使用教学 4.5万 2 6:02 App RT-qPCR实验流程 1.7万 2 7:21 App 【荧光定量QPCR】伯乐仪器qpcr上机操作 1.8万 3 3:36 App 三分钟读懂数字PCR 1.9万 1 1:07 App PCR、RT-PCR、qRT-PCR终于...