存在多种异构体,如β-actin在肌肉组织中分布较少,心肌中主要是alpha-cardiac muscle actin蛋白。 因此,并不是所有组织都适合选β-actin作为内参。 如果研究模型是心或骨骼,β-actin作为内参显然不合适。 当细胞向恶性转化时,β-actin mRNA的表达水平增加,正常组和肿瘤组间的β-actin的表达差异相当大,限制了β-act...
在进行RT-PCR实验时,为了准确测量目标基因的表达水平,通常需要选择一个合适的内参基因作为参照。内参基因是在不同条件下表达稳定的基因,其表达水平相对不会受到实验条件和样本差异的影响,因此可以作为一个相对稳定的标准来校正目标基因的表达水平。 内参基因的选择是RT-PCR实验中一个非常关键的步骤。一般来说,内参基因...
反转录RT—PCR的内参如何选择? RT—PCR就是将RNA先反转录为cDNA,再将转录得到的cDNA作为模板进行PCR反应扩增目标片段。用于反转录的引物根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异引物的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA三种都可。 1)随机引物:适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA...
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增，通过荧光探针测量，最常...
16S rRNA基因：它是大肠杆菌中 的保守序列，表达稳定且不受实 验处理的影响， 也可以作为内参基因。有...
内容提示: 一、 RT-PCR 常用的内参引物 内参基因名称 引物 引物 最佳退火 扩增基因库序列号 引物名称 序列 位置 Tm 温度 C 长度Human actin beta F305 ctgggacgacatggagaaaa 305-324 52.3 BC002409 R868 aaggaaggctggaagagtgc 868-849 52.6 59.4 564 F1379 agcgagcatcccccaaagtt 1379-139857.3 Rat actin ...
本专题就PCR实验中遇见的有关于内参的一些问题作出总结,以供读者参考。 PCR内参基因介绍GAPDH简介内参基因β-Actin简介实时荧光定量PCR 中内参基因的选择内参基因的概念和作用PCR内参基因介绍基因表达转录分析中内参基因的选择 目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-...
非综合征性腭裂患者差异miRNA与靶基因分析及人心肌实时RT-PCR内参标志物在死亡早期稳定性的评估 热度: 一、RT-PCR常用的内参引物 内参基因名称引物引物 最佳退 火扩增 基因库序列号 引物名称序列 位置Tm温度C长度 HumanactinbetaF305ctgggacgacatggagaaaa305-32452.3 ...
做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 答案 你说的应该是real time PCR吧,注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写,和real time一定要分开来.常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时(real time)的方法,测定样品中某个模版的起始量ct值但是呢,由于之前RNA提取、反转等步骤,各个步骤存在不同的效率,ct值...