RT-PCR的电泳荧光条带分析 本实验是应用于RT- PCR的电泳荧光条带分析方面。本实验所要研究的核心问题是PCR的结果如何与已知基因的DNA相对比,由此找出PCR扩增子之间的差异和缺失的基因序列,最后确定基因突变类型、位点以及进一步研究其功能的可能性等。 在生物化学中,PCR的意思是聚合酶链式反应,也就是将DNA聚合酶加...
3、微流体毛细管电泳系统(分析 RNA 浓度和完整性) 目前已经有成熟并广泛应用的生物分析仪,如 Agilent 2100、Experion™ 自动电泳工作站等。 此外还可以采用 3`:5` assay(检测提取产物中 GAPDH mRNA 的完整性来代表所有 RNA 的完整性,分析 RNA 完整性)、SPUD assay (分析 PCR 抑制剂)、NRT PCR assay(分析 ...
3、微流体毛细管电泳系统(分析 RNA 浓度和完整性) 目前已经有成熟并广泛应用的生物分析仪,如 Agilent 2100、Experion™ 自动电泳工作站等。 此外还可以采用 3`:5` assay(检测提取产物中 GAPDH mRNA 的完整性来代表所有 RNA 的完整性,分析 RNA...
3、微流体毛细管电泳系统(分析 RNA 浓度和完整性) 目前已经有成熟并广泛应用的生物分析仪,如 Agilent 2100、Experion™ 自动电泳工作站等。 此外还可以采用 3`:5` assay(检测提取产物中 GAPDH mRNA 的完整性来代表所有 RNA 的完整性,分析 RNA 完整性)、SPUD assay (分析 PCR 抑制剂)、NRT PCR assay(分析 ...
图1 PCR产物检测的琼脂糖凝胶电泳 观察结果: ① 是否有扩增产物。 ②如有拖尾或有几条区带,说明有非特异性扩增。 ③分子量标准电泳后区带是否分开。 ④与分子量标准比较,PCR产物的长度是否正确。 ⑤PCR产物的产量。 ⑥引物二聚体。 RT-PCR检测人β-actin基因表达 扩增产物长度 260 bp 问题及解决方法 无...
PCR产物检测:琼脂糖凝胶电泳注意:电泳槽里装的电泳液是1X TAE溶液;琼脂糖凝胶泡在电泳液里,凝胶是带点样孔的,样品就点在这种点样孔里;电泳槽的一边接电源负极,另一边接电源正极,RNA或DNA带负电,会从负极跑向正极;电泳时的电压设置为恒压120V;普通rtPCR的产物长度为300-400bp,使用1.2%的胶;琼脂糖凝胶配制:...
最好有图 如果marker正常，可能是PCR特异性较差。一般可以提高退火温度或减少模版。如果marker也不好，就是电泳的问题。
最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1ul (浓度10uM/L)pcr mix 10ul (用过biotek的mix,也用过takara 的EX Taq HS)rnafree水 7ul 94℃ 5min94℃ 30s55-60℃ 30s...
3.设定PCR程序。在适当的温度参数下扩增28-32个循环。为了保证实验结果的可靠与准确,可在PCR扩增目的基因时,加入一对内参(如G3PD)的特异性引物,同时扩增内参DNA,作为对照; 4.电泳鉴定:行琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果; 5.密度扫描、结果分析:采用凝胶图像分析系统,对电泳条带进行密度扫描。
1 RT-PCR 中南大学生命科学学院 2 熟悉RT反应的原理;掌握RT反应的操作步骤 熟悉PCR反应的原理 掌握PCR反应的操作步骤以及PCR反应参数的选择与优化 掌握PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测方法 3 RT反应:在逆转录酶作用下,以mRNA为模板合成cDNA(complementaryDNA)分子的过程。 PCR反应:PCR扩增是模拟天然DNA复制过程,利用DNA...