答:原理:即逆转录PCR,先在逆转录酶的作用下以mRNA为模板合成DNA,再以cDNA为模板进行PCR反应。这样低浓度的mRNA被扩增放大易于检测。是一种快速、简便且敏感性极高的检测RNA的方法,可用于分析基因的转录产物、克隆cDNA及合成cDNA探针、改造cDNA序列等。 RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5...
PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
1.了解用逆转录RT-PCR法获取目的基因的原理。 2. 学习和掌握逆转录 PCR 的技术和方法。 【实验原理】 聚合酶链式反应PCR过程利用模板变性,引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA 序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,是一个指数增长的过程,使其成为检测核酸和克隆基因的一种非常灵敏的技术。
RT—PCR原理与实验步骤 一、知识背景: 1、基因表达:DNA RNA Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制,如一个蚕丝心蛋白基因104个丝心蛋白mRNA(每个mRNA存活4d,可以合成105个丝心蛋白)共合成109个丝心蛋白。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2、PCR技术(Polymerase chain reaction):...
RT-PCR原理及方法 09-10-15 精选2021版课件 1 背景 基因的表达 基因组DNA(genomicDNA)信使RNA(messengerRNA,mRNA)蛋白质产物 不同细胞或组织表达不同的基因 精选2021版课件 2 目的 通过反转录(reversetranscription,RT)和聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)的方法,检测目的基因在特定组织或细胞中、mRNA水平...
RT-PCR的基本原理如下: 1.逆转录:反转录酶RT利用RNA模板合成与之互补的cDNA。在逆转录过程中,需要引入一条逆转录引物(反向互补RNA链)作为反转录的起始点。 2.PCR扩增:将逆转录合成的cDNA作为模板,引入一对特异性引物,通过PCR反应进行DNA扩增。PCR反应分为三个步骤:变性、退火和扩增。 3.变性:将反应温度升高至...