逆转录 pcr,或者称反转录pcr(reverse transcription-pcr, rt-pcr),是聚合酶链式反应(pcr)的壹种广泛应用的变形。在 rt-pcr 中,壹条 rna 链被逆转录成為互补 dna,再以此為模板通過 pcr 進行dna 扩增。 由壹条 rna 單链转录為互补 dna(cdna)称作“逆转录”,由依赖 rna 的 dna 聚合酶(逆转录酶)来完毕。
RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。两步法RT-PCR比较常见,在使用一个样品检测或克隆多个基因的mRNA时比较有用。在两步法RT-PCR中,每一步都在最正确条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行,然后取出1/10的反应产物进行PCR。而一步法RT-PCR具有其它优点〔表〕,cDNA合成和扩增反应在同一管中进行,不需...
逆转录PCR利用逆转录病毒依赖于RNA的DNA逆转录合成酶,在反义引物或oligo(d T)的引导下合成mRNA互补的DNA(complemental DNA),再按普通的PCR的方法用两条引物以cDNA为模板,扩增出不含内含子的可编码完整蛋白的基因。这一DNA的5,和3,端经改造可直接用于基因工程的表达,因此逆转录PCR成为了目前获取目的基因的一条重...
RT-PCR将以RNA为模板的cDNA(complement DNA)合成(即RNA的反转录(RT,reversetranscription)),同cDNA的PCR结合在一起的技术,提供了一种基因表达检测、定量和cDNA克隆的快速灵敏的方法。由于cDNA包括了编码蛋白的完整序列而且不含内含子,只要略经改造便可直接用于基因工程表达和功能研究,因此RT-PCR成为目前获得目的基因的...
【实验原理】聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性,引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,是一个指数增长的过程,使其成为检测核酸和克隆基因的一种非常灵敏的技术。一般经25-35轮循环就可使模板DNA扩增达106 倍。RT-PCR将以RNA为模板的cDNA(complement DNA)合成...
逆转录pcr,或者称反转录pcr(reverse transcription-pcr, rt-pcr),是聚合酶链式反应(pcr)的一种广泛应用的变形。在rt-pcr中,一条rna链被逆转录成为互补dna,再以此为模板通过pcr进行dna扩增。 由一条rna单链转录为互补dna(cdna)称作“逆转录”,由依赖rna的dna聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,dna的另一条链通过...
逆转录RT-PCR提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物,利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,扩增合成目的片段,而获得目的基因或检测基因表达。 RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传...
1)RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列?必须 在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers;b:Oligo dT-Adaptor Primer;和c:特异的下游引物。如果用a和b方法,是扩增的所有的cDNA(理论上),还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 在做RT-PCR遇到一怪现象,即对同一动物不同组织扩增同一段基因,结...
反转录pcrRt-pcr是逆转录rcr(逆转录pcr)和实时pcr。反转录聚合酶链反应,或称反转录聚合酶链反应,是一种广泛使用的聚合酶链反应变体。在rt-pcr中,一条核糖核酸链被反转录成互补的脱氧核糖核酸,然后被用作通过pcr进行脱氧核糖核酸扩增的模板。将单链rna转录成互补dna(cdna)被称为“反转录”,是由依赖rna的dna聚合...
逆转录pcr,或者称反转录pcr(reverse transcription-pcr, rt-pcr),是聚合酶链式反应(pcr)的一种广泛应用的变形。在rt-pcr中,一条rna链被逆转录成为互补dna,再以此为模板通过pcr进行dna扩增。由一条rna单链转录为互补dna(cdna)称作“逆转录”,由依赖rna的dna聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,dna的另一条链通过...