百度试题 结果1 题目影响RT-PCR 结果的因素有哪些?相关知识点: 试题来源: 解析 答案:mRNA的质量、反转录酶的质量、引物的质量 反馈 收藏
数字PCR即三代PCR,是对原始PCR的另一种改进,是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术,基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子,然后加入荧光信号进行扩增,从而实现靶标核酸分子的绝对计数,提高检测灵敏度和准确度。 与qPCR一样,d...
RT-PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度, 引物退火的温度,扩增的循环数等。 1、建议选择0.5-3.0 mM (相差0.5 mM)的硫酸镁作初步实验。 2、对于具有较高Tm的引物,增加退火和延伸时的温度对反应有利。较高的温度有利于减少非特异的引物结合,因而提高特异产物的得率。 3、大多数目标RNA经40轮PCR反应就能观察...
RT-PCR反应的成效受到多种因素的精密调控，其中包括硫酸镁的浓度、引物的退火温度以及扩增循环数。首先，对于硫酸镁的浓度，推荐在0.5至3.0毫摩尔每升（mM）范围内进行初步实验，每次调整0.5 mM，以寻求最佳反应效果。对于引物的处理，如果引物的Tm（熔解温度）较高，可以适当提高退火和延伸阶段的温度。
影响RT-PCR的因素主要可以概括为以下几点: 1) RNA的质量 反转录必须保证实验使用的RNA质量(如图2所示):琼脂糖电泳胶图包括28S和18S两条清晰明亮的条带(真核样品),且28S/18S≈2:1,A260/280≈2.0,泳道无弥散区、无基因组、蛋白污染等。 图2 思科捷货号:AC0307,样本:玉米种子 ...
在实验室科研中,RT-qPCR(实时荧光定量PCR)是一种常用的分子生物学技术,用于检测特定基因的表达水平。🔬🧬首先,cDNA的质量是RT-qPCR反应的关键,因为它直接影响定量结果的准确性。🔍 为了获得高质量的cDNA模板,需要考虑以下几个重要因素: RNA模板:选择高质量的RNA模板是第一步,确保RNA的纯度和完整性。
1、样本质量 样本中的DNA或RNA浓度、纯度和完整性会影响PCR的灵敏度和特异性。高质量的RNA或DNA样本较易于放大，而表达丰度较低的转录本则需要更高灵敏度的PCR反应来检测。2、反应条件 PCR反应中涉及到的温度、时间、酶、缓冲液和试剂浓度等条件也会影响PCR结果。其中影响最大的因素是引物、探针和缓冲...
四种核酸检测试剂盒,通过RT-PCR的CT均值,进行扩增效率的比对,并探讨其影响因素。 作者:同济大学附属东方医院胶州医院--王晓燕 新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第8 版)明确提出将新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测PCR法作为疑似病例诊断的金标准。目前,新型冠状病毒检测试剂种类很多,试剂的检测性能高低不一,试剂扩增效率的...