逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
答:原理:即逆转录PCR,先在逆转录酶旳作用下以mRNA为模板合成DNA,再以cDNA为模板进行PCR反映。这样低浓度旳mRNA被扩增放大易于检测。是一种迅速、简便且敏感性极高旳检测RNA旳措施,可用于分析基因旳转录产物、克隆cDNA及合成cDNA探针、改造cDNA序列等。 RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及合适旳缓冲体系在70...
答:原理:即逆转录PCR,先在逆转录酶的作用下以mRNA为模板合成DNA,再以cDNA为模板进行PCR反应。这样低浓度的mRNA被扩增放大易于检测。是一种快速、简便且敏感性极高的检测RNA的方法,可用于分析基因的转录产物、克隆cDNA及合成cDNA探针、改造cDNA序列等。 RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...
原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 逆转录酶(reverse transcriptase)是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶,至少具有以下三种活性: (1)依赖RNA的DNA聚合酶活性:以RNA为模板合成...
PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物...
1.了解用逆转录RT-PCR法获取目的基因的原理。 2. 学习和掌握逆转录 PCR 的技术和方法。 【实验原理】 聚合酶链式反应PCR过程利用模板变性,引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA 序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,是一个指数增长的过程,使其成为检测核酸和克隆基因的一种非常灵敏的技术。
RT-PCR中模板的选择 在RT-PCR 实验中,选择总RNA或纯化的mRNA作为模板进行逆转录十分重要。mRNA虽然能提供略高的灵敏度,但总RNA经常使用,具有较mRNA更重要的优势。第一,其过程需要较少的纯化流程,这保证了更好的回收模板和更好的把结果标准化为起始的细胞数。第二,避...