RT-PCR常用的内参引物 下载积分: 1500 内容提示: 一、 常用的 b-actin 引物序列 human actin f ctc cat cct ggc ctc gct gt human actin r gct gtc acc ttc acc gtt cc product size:268 rabbit actin r agt gcg acg tgg aca tcc g rabbit actin f tgg ctc taa cag tcc gcc tag product size:...
RT-PCR引物设计 检测p53基因在血细胞中的表达情况 实验思路 实验标题：检测p53基因在血细胞中的表达情况 01、输入您的文字标题 实验步骤 10% 20% 提取血细胞 提取RNA 30% RT-PCR 40% 检测DNA 01 提取血细胞、RNA 提取血细胞、RNA •提取血细胞•破碎血细胞•分离RNA•沉淀RNA•洗涤RNA•溶解RNA•...
方框中的序列即为HO-1的编码序列。有了编码序列接下来可以设计引物了,网上很多网站可以进行这一工作,这里我们偷下懒,用上海生工的免费引物设计功能 当引物设计好后,就可以开始正式实验了。注意除了目的基因的引物,还需要内参基因引物,例如β-Actin,GAPDH。 提取RNA:提取RNA,常用的如trizol法,吸附柱法。当然,这些都...
RT-PCR中引物的选择指南
内容提示: RT-PCR 中内参的作用?如何选择? 来源:丁香园 内参是看家基因.我们一般用 bate-actin,有时也用 GAPDH 它的作用在于你提取的 RNA 逆转录成 cDNA 时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR 时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都要做,跑出的条带进行灰度分析,用...
其实,实验设计比实验本身更重要!好的实验设计可以事半功倍,节省时间!对RT-PCR而言,首先是实验材料的准备和处理;然后是引物设计,这步至关重要,好的引物可使实验成功了50%;而后进行实验和数据分析。小鱼以RT-PCR的相对定量为例,将其具体流程及注意事项分享给大家。
PCR反应一般分为三个步骤:变性、退火和延伸。 1)变性,是将DNA或RNA模板解离成单链,通常在95℃下进行;具体可参考试剂商提供的手册,95℃ 15s一般适用。 2-3)退火,是引物与DNA或RNA模板结合的过程,通常在55-65℃下进行(一般来说,引物的加入是过量的,引物的设计可参考文章:超全!PCR跨内含子引物设计:从理论到...
一、RT-PCR常用的内参引物TmCHumanactinbetaF305ctgggacgacatggagaaaa305-32452.3BC002409R868aaggaaggctggaagagtgc868-84952.659.4564F1379agcgagca..
1)随机引物:适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA的转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。 2)Oligo dT:适用于具有PolyA尾巴的RNA.(原核生物的RNA、真核生物的Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。)由于Oligo dT要结合到PolyA尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会...
RT-PCR引物设计原则和方法 热度: 非综合征性腭裂患者差异miRNA与靶基因分析及人心肌实时RT-PCR内参标志物在死亡早期稳定性的评估 热度: 一、RT-PCR常用的内参引物 内参基因名称引物引物 最佳退 火扩增 基因库序列号 引物名称序列 位置Tm温度C长度 HumanactinbetaF305ctgggacgacatggagaaaa305-32452.3 ...