RT-PCR和realtimePCR的原理 1 反转录 将RNA转录成相应的cDNA。2 PCR 对cDNA进行多轮扩增，得到大量DNA。3 realtimePCR 实时检测PCR反应过程中产生的荧光信号量，精确测量DNA的定量和扩增。实验室设备和试剂 PCR仪器 保证反应温度和时间的控制。移液器 精确分配试剂和样品。试剂 包括引物、酶和缓冲液等。实验步骤 ...
PCR,按发展时间先后顺序,可以大致分为:普通PCR、实时荧光定量PCR、数字PCR三大类。上面提到的RT-PCR、qPCR、RT-qPCR、Real-Time PCR 和 dPCR 等,都是这三大类的简称或相关组合。 #01 普通PCR(口语上直接说“PCR”) 普通PCR即第一代PCR技术,以双链DNA为模板,以dNTP为底物进行扩增,特异性地扩增双链DNA,采用...
2.实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 实时荧光定量PCR,也叫Real-Time PCR,即二代PCR,是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团,在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法:SYBR Green法和T...
2. 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green...
实时荧光定量PCR逆转录聚合酶链反应儿童感染人偏肺病毒目的:比较荧光定量PCR(real-time PCR)与普通反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)对人偏肺病毒(hMPV)的检测价值。方法:Real-time PCR和RT-PCR同时对500例急性下呼吸道感染(ALRTI)患儿鼻咽部分泌物进行h MPV检测,分析两种方法的特异性和灵敏性。结果:Real-time...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。与RT-PCR一样,RT-qPCR定量分析...
(2)实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR(Real-time PCR,Quantitative Real-time PCR,qPCR),即第二代PCR技术,是指在整个扩增的过程中,引入了荧光染料或者荧光基团,随着DNA数量的成倍增加,反应体系中的荧光信号也会增强。 在整个PCR反应过程中,借助对荧光信号的强弱进行检测实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通...
1.PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,定性扩增双链DNA。 2.qPCR和Real-time PCR,指的是实时荧光定量PCR,以cDNA为模板,以dNTP为底物,对扩增出的DNA进行定量分析。 3.RT-PCR,指的是逆转录PCR,以由mRNA逆转录成的cDNA为模...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR...
Real time RT-PCR是将Real time-PCR的方法用于RT-PCR中,目的也是为了对样品浓度进行精确控制。 RT-PCR和Real time-PCR是没有必然联系的,两种技术可以一起使用,就是Real time RT-PCR;也可以单独使用。就是名称有点绕,逆转录PCR先出现,所以占用了RT-PCR这个简写,等Real time-PCR技术出现后,本来按照惯例,简写也...