实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。① 荧光染料法（SYBR Green）：SYBR G...
一、什么是PCR? 二、PCR的原理 三、PCR的分类 1.普通 PCR 2.实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 3.数字PCR(Digital PCR, Dig-PCR, dPCR) 4. 逆转录PCR( Reverse T ranscription - PCR , RT - PCR) 5.实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR, RT-qPCR) 四、总结 五、资料自取...
real time PCR 的定量使用荧光色素,目前有二种方法。一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素,例如SYBR Green荧光染料;另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针(probe),如Taqman探针。、 两种方法原理不同。SYBR Green荧光染料游离时不发光,当反应体系中存在双链DNA时,SYBR Green与双链DNA...
1.PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,定性扩增双链DNA。 2.qPCR和Real-time PCR,指的是实时荧光定量PCR,以cDNA为模板,以dNTP为底物,对扩增出的DNA进行定量分析。 3.RT-PCR,指的是逆转录PCR,以由mRNA逆转录成的cDNA为模...
建议实时定量PCR (quantitative real-time PCR) 应当简写为qPCR,反转录PCR (reverse transcription–qPCR) 应当简写为RT-qPCR。用RT-PCR简写表示qPCR可以引起混乱,并且与传统RT-PCR的平常应用不符。 1.2内参基因 内参基因应当指的是参照基因(reference genes),而不是管家基因(housekeeping genes)。
(2)实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR(Real-time PCR,Quantitative Real-time PCR,qPCR),即第二代PCR技术,是指在整个扩增的过程中,引入了荧光染料或者荧光基团,随着DNA数量的成倍增加,反应体系中的荧光信号也会增强。 在整个PCR反应过程中,借助对荧光信号的强弱进行检测实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通...
Real-time PCR有多种应用,其中包括基因表达研究。通过实时监测特定基因的表达水平,我们可以了解基因在不同条件下的转录变化情况,从而理解其在生物过程中的功能和调控机制。此外,Real-time PCR还可以用于微生物检测。通过设计特异性的引物,可以快速、精确地检测病原微生物的存在与否,为临床诊断和疾病防控提供帮助。 除了...
1. 从少量样品中提取RNA(1-10mg组织或102-104细胞),加800ul Trizol,后加糖原,糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml时不会影响反转录cDNA第一链的合成,也不影响PCR反应。 2.匀浆后,加氯仿前,样品可在-70℃放置一个月以上。RNA沉淀可以保存在75%酒精中,2-8℃一个星期或-20℃一年以上。如果要长期...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。与RT-PCR一样,RT-qPCR定量分析...