1)三蒸水的配制:去离子水用蒸馏器进行蒸馏(去除无机和有机杂质),重复三次,三蒸水就制备完成,制成的三蒸水应及时使用; 2)准备实验用具与材料:提前准备好500mL或1000mL玻璃瓶、天平、CO2、碳酸氢钠缓冲液、三蒸水、玻璃棒或搅拌容器、过滤器、RPMI 1640培养基干粉以及超净工作台; 3)消毒灭菌:对玻璃器皿我们要...
(1)去离子水用蒸馏器进行重新蒸馏(去除无机和有机杂质),制成1000mL三蒸水。三蒸水应及时使用,如果放置一段时间,则使用前须高压处理三蒸水(15MPa,20min)。 (2)待水温降至15~30℃,加入合成培养基干粉,用磁力搅拌一定时间(2~4h)使之充分溶解。 (3)配制RPMI1640培养基时应通入适量CO2加入6mol/L HCI调pH...
1、温度条件(37±0.5℃) 2、pH条件 (7.2～7.4) 3、气体条件 4、水的质量(三蒸) 5、渗透压 6、营养条件 7、无菌条件 二、培养基的分类 1、平衡盐液 2、天然培养基(小牛血清、胚胎液) 3、合成培养基(化学成分清楚) 三、RPMI1640培养基的配制 1、RPMI1640 10g 2、丙酮酸钠 0.11g 3、Hepes(羟乙基哌...
第一步,溶解干粉:首先将称量好的RPMI 1640培养基干粉按比例的添加到提前配制好的三蒸水中,使用玻璃棒或搅拌器进行搅拌从而使RPMI 1640培养基干粉充分溶解到三蒸水中; 第二步,添加补充物:在溶解的培养基中我们可以根据细胞的类型,根据需要添加氨基酸、无机盐、维生素、生长因子等营养成分; 第三步,添加添加剂:根据...
第二步,配制RPMI 1640培养基:首先称量RPMI 1640培养基干粉,接着按比例溶解到提前准备好的三蒸水中,用玻璃棒或搅拌器进行搅拌使其充分溶解;其次根据细胞类型,按需添加氨基酸、无机盐、维生素等营养成分,同时根据细胞的生长特性,按照实验设计、目的按比例添加双抗、胎牛血清或生长因子等成分;然后将溶解好的试剂通入适量...
1、因RPMI1640中含有的谷氨酰胺半衰期短,只有1~3周,故新配制的培养基使用2周后,再使用时,应临时补加谷氨酰胺。补加办法: 1)100倍浓缩的谷氨酰胺液使用时加入培养液总体积的1/100。 2)100倍浓缩谷氨酰胺溶液(200mmol/L)的配制:2.9222g谷氨酰胺,加双馏水至100ml,充分搅拌溶解后,过滤除菌。分装小青瓶(每...
表A.1 RPMI-1640 肉汤培养基 1 L 配制过程 步骤 过程 1 10.4 g RPMI-1640 肉汤干粉,34.53 g MOPSa,溶解于 900 mL 蒸馏水 2 加入 MOPS(终浓度为 0.165 mol/L),搅拌至溶解 3 使用 1 mol/L 氢氧化钠调节 pH 至 7.0(25 oC) 4 补水至 1 L 5 过滤消毒储存在 4 oC 备用 a MOPS表示3-(N-...
RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写,代指洛斯维·帕克纪念研究所。 RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基,1640是培养基代号。RPMI-1640基础培养基最初是为淋巴细胞培养专门设计的,现在已广泛应用于各种正常细胞核癌细胞的培养,尤其是悬浮细胞的培养,是使用最为广泛的培养基之一。其含有多类细胞培养所需的氨基...
RPMI-1640基础培养基是zui常用的一种培养基,由 Moore et al 在1967 年为人的白血球细胞开发的,并以他所在的研究所(RoswellPark Memorial Institute)而命名。目前用于多种动物细胞的生长。 高压灭菌型是该培养基的热稳定配方,可保证其营养成份在高压高热中不受影响。该配方中不含 L-谷氨酰胺及碳酸氢钠,需在高温...
RPMI1640细胞培养基与其它培养基不同之处在于含有还原剂和生物素、维生素B12和PABA。另外,1640细胞培养基中肌醇和胆碱含量也高于其它培养基。1640培养基不含蛋白质、脂类或生长因子,因此通常需要加入10%胎牛血清。 RPMI1640细胞培养基配方与配制方法: Inorganic Salts (g/liter) Ca(NO3)2·4H2O 0.10000 MgSO4 (...