RPA扩增产物可以通过多种方式检测,如结合化学发光检测[12]、表面增强拉曼散射等方式[13]检测RPA扩增产物,其中最经典的3种检测方式为实时荧光检测[14]、侧向层析试纸条检测反应(lateral flow dipstick,LFD)[15]及凝胶电泳检测[16]。 二、RPA...
原理:这是一种基于酶促反应的 DNA 体外等温扩增技术,主要利用限制性内切酶剪切 DNA 识别位点的能力和 DNA 聚合酶在切口处向 3'延伸并置换下游序列的能力,在等温条件下进行扩增。整个过程由准备单链 DNA 模板、生成两端带酶切位点的目的 DNA 片段、SDA 循环扩增 3 个步骤组成。 SDA链置换扩增原理示意图(图源:Re...
二、RPA扩增技术原理 RPA扩增技术,顾名思义,就是利用RPA技术扩大自动化的覆盖范围,实现更高效的自动化过程。通常情况下,RPA扩增技术包括以下几个步骤: 1.自动识别 首先,软件机器人通过对用户的操作进行模拟来识别业务流程,同时还要能够自动获取数据和文本,将其转化为可处理的格式。 2.扩展功能 通过应用新的技术,比...
通过RPA-LFS技术,等温扩增lytA基因,可在35 min内快速、灵敏并特异地检测出阳性菌,并且检测结果较PCR检测方法更为准确,最低检测限(limit of detection,LOD)仅为3.32 CFU[11,27],与其他高灵敏度检测方法LOD相似。 流感嗜血杆菌根据荚...
重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 1.原理介绍 重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是以T4噬菌体核酸复制机制为原理,通过重组酶蛋白(T4 uvs X)、单链结合蛋白(T4 gp32)和DNA聚合酶(Bsu)的作用,在体外完成核酸的恒温扩增反应。其反应原理如图1A所示:①在ATP参与下,重组酶T4 uvsX分别与上、...
RPA技术原理: 重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内...
RPA 技术原理 RPA 体系的重点是重组酶,这些酶与寡核苷酸引物形成复合体,并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合(SSB)蛋白与被取代的 DNA 链结合,并使形成的 D 环保持稳定。然后从引物启动由聚合酶介导的 DNA 扩增,但前提是存在靶标序列。一旦启动,扩增反应将快速进行,因此开始时只需一点靶标 ...
常规PCR,环介导的恒温PCR(LAMP),重组酶聚合酶扩增(RPA)三种分子扩增技术原理和对比 常规PCR PCR即聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction)的缩写,1983年出现的一种对已知DNA片段进行体外扩增的技术。它利用耐高温的DNA聚合酶(Taq 酶),将模板DNA,引物,脱氧核苷三磷酸(dNTP)和缓冲液等在不同温度间循环,从而达到...
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。 RPA重组酶聚合酶扩增原理示意图 3、RCA滚环扩增技术 原理:以环状 DNA 为模板,通过一个短的 DNA 引物(与部分环状模板互补),在 phi29 DNA...