图2箭头所示是经LC-MS验证的两个实际切割位点，即该探针导致了RNAse H酶切位点不单一。结合H Inoue的结论来看，非特异性切割的原因可能是探针的5’端没有添加适量的甲基化RNA序列。图2: 基于RNase H与嵌合探针对mRNA 5’端寡核苷酸的切割 结语 结合H Inoue等报道的RNase H切割探针，mRNA加帽率检测中RNase H...
RNase H有酶切位点吗？
1、核糖核酸酶H(Ribonuclease H(RNase H))载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 (三)获得含重组表达质粒的表达菌种 ...
以诺华Beverly M等开发的加帽率检测为例,5’端没有甲基化RNA序列可能是导致RNase H酶切位点不单一的原因,可考虑从5’端嵌合RNA序列进行优化。为建立稳健的mRNA加帽率分析方法,需对RNase H酶切位点的特异性、单一性进行探索。 参考文献: [1] Inoue H,Hayase Y, Iwai S, Ohtsuka E. Sequence-dependent hydr...
以诺华Beverly M等开发的加帽率检测为例,5’端没有甲基化RNA序列可能是导致RNase H酶切位点不单一的原因,可考虑从5’端嵌合RNA序列进行优化。为建立稳健的mRNA加帽率分析方法,需对RNase H酶切位点的特异性、单一性进行探索。 参考文献: [1] Inoue H,Hayase Y, Iwai S, Ohtsuka E. Sequence-dependent hydr...
透析复性,通过透析溶液的尿素浓度梯度逐步递减,使变性的CpRNase Hlla和cpRNase HIIb复性,所获得的酶比活性与用非变性纯化获得的蛋白质相当。 进一步以12个碱基对(bp)的RNA/DNA杂合双链做为底物,确定了CpRNase Hlla 和CpRNaseHIIb酶促反应的最适pH值、金属离子依赖性和酶切位点特异性。CpRNaseHlla 和CpRNase...
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。 返回顶部 点击询价 联系方式 热门标签:人核糖核酸酶HRNASEH重组蛋白 相关产品 电议 ...
DZIP1L蛋白封闭多肽 组织蛋白酶G自身抗体(Cath G Ab)ELISA试剂盒 重组蛋白操作步骤: (一)获得目的基因 1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。 2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA...
基因,并在引物中添加带有酶切位点的接头。最终合成引物如下: 6P-RNS 1 -F:5’--GGGCCCCTGGGATCCAACAATTCTGGTTTTGACCAC--3’(SEQIDNO:1) 6P-RNS 1 -R:5’--GTCGACCCGGGAATTCTTAAGGCGGGGGAAAGGTA--3’(SEQIDNO:2) 6P-RNS 2 -F:5’--GGGCCCCTGGGATCCTCCTCGCAATTGTTCGACC--3’(SEQIDNO:3) 6P-...
2.根据权利要求1所述的利用环化RNaseH检测基因多态性SNP位点的方法,其特征是,所述的第一步具体步骤包括1. 1)设计特异引物对表达载体PTWIN的多克隆位点进行突变,将酶切位点Not I前的氨基酸序列突变为寡聚甘氨酸,其中突变正向引物ACTTTGTCGCGAATGACATCATTGTACACAACGGAGGAGGAGG AGGCGGCCGCAAA突变反向引物CAGGAAGAGCCCTC...