1、牛胰RNase A载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 (三)获得含重组表达质粒的表达菌种 1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白...
以诺华Beverly M等开发的加帽率检测为例，5’端没有甲基化RNA序列可能是导致RNase H酶切位点不单一的原因，可考虑从5’端嵌合RNA序列进行优化。为建立稳健的mRNA加帽率分析方法，需对RNase H酶切位点的特异性、单一性进行探索。参考文献：[1] Inoue H,Hayase Y, Iwai S, Ohtsuka E. Sequence-dependent hydr...
RNase H有酶切位点吗？
以诺华Beverly M等开发的加帽率检测为例,5’端没有甲基化RNA序列可能是导致RNase H酶切位点不单一的原因,可考虑从5’端嵌合RNA序列进行优化。为建立稳健的mRNA加帽率分析方法,需对RNase H酶切位点的特异性、单一性进行探索。 参考文献: [1] Inoue H,Hayase Y, Iwai S, Ohtsuka E. Sequence-dependent hydr...
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物...
以诺华Beverly M等开发的加帽率检测为例,5’端没有甲基化RNA序列可能是导致RNase H酶切位点不单一的原因,可考虑从5’端嵌合RNA序列进行优化。为建立稳健的mRNA加帽率分析方法,需对RNase H酶切位点的特异性、单一性进行探索。 参考文献: [1] Inoue H,Hayase Y, Iwai S, Ohtsuka E. Sequence-dependent hydr...
D.引物的3′端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记 E.两条引物的Tm值应该尽量相近 13.下列关于TaqDNA聚合酶的描述,正确的是()。 A.催化一条双链DNA3′端羟基与另一条DNA5′端磷酸根形成3′,5′-磷酸二脂键 B.TaqDNA聚合酶具有3′→5′外切酶活性,PCR扩增过程中有较正功能 ...
否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。 关键词:人核糖核酸酶A10 RNASE10 重组蛋白 公司同类产品 小鼠胰辅脂酶(CLPS)重组蛋白 小鼠胰辅脂酶(CLPS)重组蛋白公司正在出售的产品 原钙粘蛋白β5抗体 突触结合蛋白12抗体 SLAP蛋白抗体 肝细胞核...
1.2.1引物设计与合成根据NCBI数据库中人RNase10基因序列(序列号:NM_001012975)设计引物,对其信号肽切割位点和pET32b(+)载体多克隆位点进行分析,在去除了信号肽的RNase10基因DNA序列两端分别加上KpnⅠ及EcoRⅠ的酶切位点和保护碱基,另外在上游引物处添加肠激酶位点以便在融合表达后获取目的蛋白序列[4],引物序列为P1,...
进一步以12个碱基对(bp)的RNA/DNA杂合双链做为底物,确定了CpRNase Hlla 和CpRNaseHIIb酶促反应的最适pH值、金属离子依赖性和酶切位点特异性。CpRNaseHlla 和CpRNase HIIb酶促反应的最适pH值均为9-10。与已经鉴定的RNa.se Hll相似,CpRNase 聊a和CpRNase HIIb的酶促活性也依赖于二价金属离子,其中M矿和...