对于差异表达分析而言,首先,我们可以先将 gene_id 改为 gene_name。其次,当我们的数据集存在批量效应时,我们可以使用 DEseq2的 SizeFactor 对其进行归一化,并使用 wilcoxon 的 t 检验来计算基因的 p 值。在这里,我们用一个从RNA-seq上游的定量包FeatureCounts生成的表达矩阵来演示差异表达分析的流程。我们的流程适...
AveExpr是基因在所有样本中的平均表达量,t是用于t-test的,可以衡量组间差异显著性,P.value就是P值,adj.P.Val是校正过的P值,这里我用的是“BH”方法进行的校正。B是表示基因表达差异的贝叶斯统计量。这里我们基本上只用到logFC、P.value和adj.P.Val,其它可以不用管。通常我们认为|logFC|>=1,P值<0.05就算...
7.4. DESeq2对象 根据计数和元数据创建DESeq2对象 # - countData : 基于表达矩阵 # - colData : 见上图 # - design : 比较 ddsMat <- DESeqDataSetFromMatrix(countData = countdata, colData = metadata, design = ~Group) # 查找差异表达基因 ddsMat <- DESeq(ddsMat) 7.5. 统计 获取基因数量的基本...
对于这样的问题,Deseq尝试对数据进行矫正(矫正因子),使表达量处于中间位置的基因表达量应该是基本相同的(即使用表达量处于中间的基因表达量值作为参照,而减少高表达基因的作用)。 Deseq: 校正因子=样本表达中位数/所有样本表达量中位数:回答了一个关键的问题:Deseq不同差异比较组间,计算得到的表达量值不同。因 ...
本文以从NCBI SRA下载的开源RNA-seq数据为例,演示基于 tophat2 和 cufflinks 的基因表达量差异分析。 Part.1 SRA数据下载与表达量分析所需软件下载安装 SRA数据简介 随着高通量测序的发展,测序价格不断下降,测序通量也不断提高,使很多实验室,可以获得大批量的数据,但是...
(9)基因差异表达计算 可参考说明文件:https://bioconductor.org/packages/release/bioc/vignettes/DESeq2/inst/doc/DESeq2.html 1.执行命令R 进入R环境,并读取差异表达分析包 DESeq2 Rlibrary(DESeq2) 2.读取短片段比对的基因计数文件 AP53_counts.txt 和归一化因子文件 AP53_rpkmFactor.txt,并查看其内容 ...
现在开始说得到表达量数据后如何做差异分析。 一、R包安装 1.1 常用软件包。 找差异基因要用到edgeR和DEGseq这两个R包, edgeR用来对得到的reads数进行归一化处理;DEGseq用来找差异基因。 基因表达量归一化:每个样本测序的总量不一样,要把它们处理到同一个数量级。
承接上节RNA-seq入门实战(三):在R里面整理表达量counts矩阵和RNA-seq入门实战(二):上游数据的比对计数——Hisat2+ featureCounts 与 Salmon 在进行差异分析前需要进行数据检查,保证我们的下游分析是有意义的。 以下展示了样本hclust 图、距离热图、PCA图、前500差异性大的基因热图、相关性热图(选取了500高表达基因...
RNA-seq是一种对基因表达研究方法,可以用来检测基因的表达水平、转录多样性、基因结构的变化以及表达水平变化的模式。RNA-seq差异表达基因分析主要是检测每组样本中表达较高或较低的基因,以此来识别在条件之间表达差异的基因。通常使用RNA-seq差异表达基因分析时,会将基因分为上调基因和下调基因,而下调基因指的是新的...