5实验结果 l正义链和反义链PCR扩增琼脂糖凝胶图 Marker:DL2000 Sense:正义链产物 Antisense:反义链产物 二.RNA-RNApull down实验 1实验目的:通过RNA-RNA pull down实验,在细胞中获取与目的RNA有相互作用的RNA;并进行qPCR检测。 2实验材料 l主要试剂 l主要仪器及器材 3实验方法 l体外转录&生物素标记RNA 1、取...
pull down的作用是检测两个蛋白在体外是否有直接结合。 RNA pull down与CHIRP的比较 CHIRP是一种检测与RNA绑定的DNA和蛋白相互作用的方法。其方法是设计与目的RNA互补的生物素探针,拉下目的RNA的同时落下与之结合的DNA和蛋白,最后根据需求提取产物分析即可。...
此外,Nron与KPNB1的相互作用通过RNA Pull-down(图5C)和RNA免疫沉淀测定(图5D)进行了验证。几个核心生物钟基因(Per1、Per2、Rev-Erbα)在NKO小鼠的肝脏中下调,QPCR验证结果一致(图5E)。接下来用肝脏原代细胞确定了昼夜节律成分的蛋白质水平(图5G)。用免疫荧光测定证实了NKO 肝细胞中PER2的显着核定位(图5H)...
(一种H3K79甲基转移酶)RIP qPCR实验确定了LAMP5-AS1与DOT1L结合截短型 RNA pull down实验进一步明确了与LAMP5-AS1结合的DOT1L结构域体外酶活实验表明LAMP5-AS1与DOT1L的结合促进了DOT1L的甲基转移酶活性ChIP实验表明LAMP5-AS1影响MLL融合蛋白核心靶基因的H3K79me2/3水平临床分析LAMP5-AS可作为MLL白血病不良预后...
研究结果表明，VN1R5通过cAMP/PKA途径调节Sp1的转录活性以影响lnc-POP1-1的表达。图4 | VN1R5通过调控Sp1的启动子活性来影响lnc-POP1-1的表达 5.lnc-POP1-1促进DNA修复过程并与MCM5结合 为了深入研究lnc-POP1-1影响HNSCC细胞顺铂耐药性的机制，研究者使用RNA pull-down和蛋白质谱分析(LC-MS/MS)来探索推定...
使用elf18进行处理,通过RT-qPCR实验对不同株系的相关基因表达情况进行分析。结果显示,E1/m19a株系与ELENA1过表达植物 (E1#16) 相比PR1表达显著下降,但略高于med19a-1突变体(m19a)。在ELENA1 KD突变体背景中,MED19a的过表达 (e1#10/m19a)对PR1表达没有显著影响,与e1#10/M19a相比E1#16/M19a株系PR1表达...
作者通过RNA pull down WB(云序生物可提供)证明了AET1与RACK1A以及eIF3h结合,通过GST标签的RACK1A蛋白也能够富集eIF3H(图A)。AET1与RACK1A以及eIF3h的结合是否和mRNA相关?作者进一步利用RIP-seq(云序生物提供)快速明确哪些mRNA能够和蛋白AET1结合,分析结果显示AET1的功能丧失可以通过tRNA的表达分布的失衡从而影响蛋白...
a RIP-qPCR: 挑选功能最为明显的1个circRNA做RIP-qPCR实验,检测circRNA是否与AGO2蛋白结合。(AGO2是circRNA发挥海绵作用的指示蛋白) b RNA pull down:对上述circRNA进行RNA pull down实验,拉下来的RNA进行定量PCR检测,检测生信预测中与该circRNA结合的10-20疾病miRNA。
将RNA进行反转录为cDNA。若已知靶RNA，使用qPCR分析；若是靶RNA未知，则使用微阵列和测序分析。RIP实验注意事项：（1）最重要的一点是，RIP实验过程中所涉及的所有试剂、抗体、容器及耗材都不能含有RNA酶；（2）实验中应该设置一个或多个阴性对照实验，以排除假阳性结果；（3）如果需要使用甲醛交联固定，建议预实验...