RNA Pull Down 是一种用于研究RNA与蛋白质之间相互作用的实验技术;质谱分析 (Mass Spectrometry, MS) 是一种可用于鉴定和分析复杂生物样品中的蛋白质质量和序列信息的高效、准确的生物分析技术。RNA Pull Down 质谱分析是结合了 RNA Pull Down 和质谱分析的技术,主要用于鉴定特定 RNA 分子与之相互作用的蛋白质。 1...
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。 实验流程: 2.1生物...
RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋⽩是否与RNA 相互作...
RNA pulldown质谱技术所需材料包括:1)RNA bait;2)目标蛋白和质控蛋白;3)RNA pulldown probe或其他卫星RNA序列。RNA bait是被用来进行RNApulldown实验的RNA序列,可以根据具体的研究目的选择不同的RNA bait。目标蛋白和质控蛋白是用于证明RNA pulldown蛋白是特定结合而非非特异性结合的蛋白。RNA pulldown probe是用来...
应用酶消化法体外分离增生性瘢痕皮肤组织与正常皮肤组织原代成纤维细胞,采用qRT-PCR检测细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达,通过RNA pull-down联合质谱技术检测与长链非编码RNA H…
RNA Pull Down 是一种用于研究RNA与蛋白质之间相互作用的实验技术;质谱分析 (Mass Spectrometry, MS) 是一种可用于鉴定和分析复杂生物样品中的蛋白质质量和序列信息的高效、准确的生物分析技术。RNA Pull Down 质谱分析是结合了 RNA Pull Down 和质谱分析的技术,主要用于鉴定特定 RNA 分子与之相互作用的蛋白质。
其中RNA pulldown 是检测 RNA 结合蛋白与其靶 RNA 相互作用的主要技术之一,是近年来研究 lncRNA 、 circRNA 与蛋白质相互作用的主要手段。 1、RNA pulldown 原理与应用 1.1 RNA pulldown 的技术原理 RNA pulldown 技术为研究 RNA 和蛋白质相互作用的核心技术,该技术利用生物素标记的 RNA 和链霉亲和素标记的磁珠...
RNA 过表达质粒：基因合成 +测序验证；2、体外转录模板准备：设计含 T7 启动子引物，PCR 扩增得到转录模板；3、体外转录：以 PCR 产物为模板，体外转录得到目的 RNA；4、RNA pull down ：通过磁珠 -RNA 探针复合物富集互作的蛋白；5、银染质检：SDS -PAGE 电泳银染检测富集蛋白的情况 ；6、质谱鉴定：通过质谱...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤：一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞)准备细胞5E7细胞。用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞，然后转移到离心管。通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞，并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。二、细胞裂解 ...
RNA pull-down用于检测RNA-蛋白质、或RNA-RNA之间相互作用的技术,其基本原理是:利用带标签的目标RNA探针与待测蛋白质或RNA进行体外或体内结合,通过亲和作用将复合物分离出来,之后采用Western Blot、质谱技术检测结合蛋白,或采用qPCR、测序技术检测结合RNA。