RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋⽩是否与RNA 相互作...
RNA Pull-down用于研究RNA与蛋白质之间的相互作用。这项技术在细胞裂解液中使用生物素标记的RNA探针来捕获与其结合的蛋白质。随后，通过链霉亲和素偶联的磁珠将这些RNA-蛋白质复合物分离出来，从而实现对结合蛋白的富集。之后可以通过质谱分析、Western blot等方法鉴定所富集的蛋白质。图2 RNA Pull-down实验流程图（Pan...
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。 实验流程: 2.1生物...
RNA-pulldown 实验可以在体外样品中通过高亲和性的标签(例如生物素,biotin),选择性地获取蛋白-RNA复合物。RNA探针可以是生物素化标记的,和细胞裂解液或者重组蛋白孵育后,通过strepavidin agarose 或者磁珠进行分离。分离后获得的蛋白可以通过western blot 或者质谱(mass spectrometry)来进行分析。这是一种研究lncRNA和蛋白...
其中RNA pull down是一种体外研究技术，该方法使用体外转录法标记生物素RNA探针，与胞浆蛋白提取液孵育后形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。后续可进行WB验证或MS质谱分析。实验技术流程：合成基因载体、PCR扩增、T7转录标记RNA、磁珠蛋白裂解液孵育、洗脱提...
这一步骤是RNA pull-down的关键,确保了目标RNA及其结合物质的富集。 裂解缓冲液作用: 裂解缓冲液的主要作用是打破细胞膜,释放细胞内的RNA和蛋白质。通常含有低浓度的去污剂(如Triton X-100),可以有效地溶解细胞膜而不破坏RNA和蛋白质的结构。此外,裂解缓冲液还可以含有蛋白酶抑制剂和RNA酶抑制剂,以防止蛋白质降解...
RNA pull-down其目的是检测与RNA互作的蛋白。实验过程简单来说就是把感兴趣的RNA进行体外转录,并标记(如生物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,形成RNA-蛋白质复合物,然后将分离得到蛋白质,通过WB 或质谱进行验证或鉴定。 实验步骤: l体外转录模板制备
RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,western-blot检测特定蛋白或者质...
RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,western-blot检测特定蛋白或者质...
RNA pull down 原理与操作步骤 原理: RNA pull-down其目的是检测与RNA互作的蛋白。 实验过程简单来说就是把感兴趣的RNA进行体外转录,并标记(如生物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,形成 RNA- 蛋白质复合物,然后将分离得到蛋白质,通过 WB 或 质谱进行 验证或鉴定。