RNA pulldown 的原理是用生物素标记 RNA 模拟目的 RNA 与蛋白直接孵育结合,这就要求探针序列要与目的 RNA 序列一致,而生物素标记探针只能是线性的,要和 circRNA 序列尽量保持一致,就要求探针序列要在 circRNA 全长基础上延长一段circRNA独有的接头序列,来更接近 circRNA 环状的序列。 RNA pulldown 实验是很成熟的...
结果描述也比较简单,只要描述清楚PAARH组可富集各种miRNA即可。 三、pulldown实验 1、实验原理 Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质A固定于某种基质上,在进行细胞抽提时,可与蛋白A相互作用的配体蛋白B被吸附。被吸附的蛋白B可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白A与钓出蛋...
今天我们来聊聊RNA Pull down实验,这可是个挺有意思的实验哦!不过,这个实验步骤有点多,咱们一步一步来,慢慢搞定。 RNA提取 🧬 首先,咱们得提取RNA。这个步骤其实还挺关键的,毕竟RNA这东西很脆弱,稍微不注意就搞砸了。具体操作如下: 准备样品:把你的Input样品、sense、antisense和beads分别放进1ml的TRIZOL里,然...
RNA pulldown的原理是用生物素标记RNA模拟目的RNA与蛋白直接孵育结合,这就要求探针序列要与目的RNA序列一致,而生物素标记探针只能是线性的,要和circRNA序列尽量保持一致,就要求探针序列要在circRNA全长基础上延长一段circRNA独有的接头序列,来更接近circRNA环状的序列。 RNA pulldown实验是很成熟的,原理也是被公认的,而...
GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关...
实验结果示例: 图RNA pulldown质谱检测示例图 A RNA pulldown蛋白银染示例图。B,C 质谱检测结果GO聚类分析示例图。D,E 质谱检测结果KEGG信号通路分析示例图。F 筛选出蛋白相互作用图
图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或...
RNA pull-down实验结果分析需要对所捕获的RNA结合伴侣进行进一步鉴定和确认。 一般来说,可以通过以下几种方法进行结果分析: 1. SDS-PAGE和质谱分析 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱分析技术,可以将酸化时迁移起来的复合物(含RNA及其结合伴侣)从琼脂珠中洗出。之后可以利用两种方法将 ...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...