详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做!, 视频播放量 3317、弹幕量 1、点赞数 70、投硬币枚数 11、收藏人数 206、转发人数 28, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领
简单来说, RNA pulldown 和 RIP ,前者是已知 RNA 拉蛋白,后者是已知蛋白去拉 RNA。 RNA pulldown 和 RIP 是分子机制研究中可以用于相互佐证的两个经典技术。 2、RNA pulldown 的阴性对照探针如何选择? RNA pulldown 阴性探针一般有 lacZ 探针和目的 RNA antisense 反义链探针两种类型。 lacZ 探针是通用阴性对...
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。 实验流程: 2.1生物...
一、体外RNA pull down: (1)体外转录得到带标记的RNA探针(对照组用反义探针); (2)裂解待测样本; (3)RNA探针与样本裂解液孵育; (4)特异性亲和磁珠调取“RNA-蛋白”或“RNA-RNA”互作复合体; (5)洗脱蛋白质或提取RNA进行检测和分析。 二、体内RNA pull down: (1)制备带标记的RNA探针或者RNA表达载体(对照...
RNA pulldown阴性探针一般有lacZ探针和目的RNA antisense反义链探针两种类型。 lacZ探针是通用阴性对照探针,是所研究物种中不存在的序列,相当于无义序列。 Antisense反义链探针相当于目的RNA相同长度的突变探针,但是反义链不能完全排除细胞内的同源性,非特异结合风险更高。
RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1.前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;打开PCR仪; ...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法, 一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。 为排除假阳性所设的一组对照实验是在没有诱饵蛋白存在的条件下,将样品结合到GST上。该对照可以是...
RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1.前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;...
制备带标记的RNA探针是RNA pulldown实验中最开始、也是最关键的步骤。 首先确定目标序列。根据实验目的确定合适的RNA序列,可以是目标转录本的全部序列或部分序列;对照组通常采用反义序列,也可以是无关序列。如果目标序列小于100bp,建议直接合成带标记的RNA,如果大于100bp,可以按照如下步骤体外转录获得。
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。