基本原理 EMSA的基本原理是利用凝胶电泳技术来观察蛋白质与DNA或RNA形成复合物后迁移速率的变化。当蛋白质与标记的DNA或RNA片段结合后，形成的复合物比未结合的探针分子更大，因此在电泳过程中迁移速度较慢。通过比较样品中自由探针与结合探针的比例，可以推断出蛋白质与核酸的结合情况。EMSA基本原理 实验步骤 准备样本...
ChIP、RIP、RNA-pull-down、EMSA、Luciferase原理 1 ChIP实验 通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。将处于适当生长时期的活细胞用甲醛交联后将细胞裂解, 染色体分离并打碎为一定大小的片段200bp-1000bp;然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与 DNA交联的复合物, 对特定靶蛋白与DNA片段...
RNA-EMSA(RNA Electrophoretic Mobility Shift Assay),凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率改变实验,其原理是RNA-binding proteins (RBPs) 蛋白-RNA探针复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳中比自由探针迁移更慢,是一种用于体外In Vitro检测RNA-binding proteins (RBPs) 蛋白与RNA片段相互作用的技术。
九、EMSA(electrophoretic mobility shift assay) 凝胶迁移或电泳迁移实验,是一种研究DNA-蛋白质或RNA-蛋白质相互作用的技术。 原理:将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。RNA复合物比非结合的探针移动的慢。该实验是将纯化的蛋白和细胞粗...
EMSA技术主要基于蛋白-探针(DNA或RNA)复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针,当核酸探针与样本蛋白混合孵育时,样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物。 这种复合物由于分子量大,在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢,而没有结合蛋白的探针则较快;孵育的样本...
目的:RNA pull-down实验主要用来寻找与目的lncRNA结合的蛋白。 原理:蛋白与生物素标记的RNA孵育结合,富集的蛋白通过SDS-PAGE分离,最后选择特异性蛋白条带进行质谱鉴定。 3. EMSA(RNA已知,蛋白已知) 目的:RNA EMSA是通过凝胶电泳迁移检测蛋白-RNA互作的一种技术。
5、凝胶阻滞实验（gel retardation assay）：又叫DNA迁移率变动实验（DNA mobility shift assay），或电泳迁移率实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA），或条带阻滞实验（band retardation assay）。它是根据裸露的DNA与结合有某种蛋白的相同大小的DNA在电泳中具有不同的迁移率（DNA-protein复合物由于具有较...
RNA保温实验原理:很简单，就是取一点样品，人为的升温并保持一段时间，接着通过琼脂糖跑胶的操作。如果...
目前共有三种应用广泛的蛋白-DNA互作研究技术,我们称之为蛋白-DNA互作三驾马车,它们分别是:ChIP、EMSA和双荧光素酶实验。今天我们来聊聊该系列最后一种-双荧光素酶报告基因实验(luciferase Assay)。说双荧光素酶报告基因实验前先来看看荧光素酶报告基因。
4）lncRNA转录后直接结合附近的DNA序列，抑制转录。该过程的特殊之处在于不依赖于蛋⽩，是核酸之间直接结合。5）lncRNA可影响转录复合物以及RNA聚合酶的催化活性，进⽽影响转录过程。6）lncRNA影响染⾊质结构的组蛋⽩修饰包括甲基化、⼄酰化，进⽽调节转录过程。转录后⽔平 7）lncRNA可结合mRNA影响可变...