RNA反转录完成后,通常需要对反应生成的cDNA产物进行质检,质量检测手段一般有以下几种: cDNA 电泳检测 取约5 μl 反应产物,在 1%琼脂糖凝胶上电泳,EB 染色,紫外成像检测,呈现出大小在 200～10Kb 的条带,其中重心区域在 1～4Kb 之间,这说明反转录完全,得到了高质量的 cDNA(如果 RNA 丰度低,电泳也可能是无产物...
针对不同的实验要求,需要选择最合适的逆转录酶,近岸蛋白的NovoScript II Reverse Transcriptase耐高温逆转录酶,可以大幅提高热稳定性和cDNA合成效率;并且该产品无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量。该酶可以在高...
实验中所有枪头、离心管等转移工具必须是无酶的,否则可能会导致RNA降解! 4.cDNA跑q-PCR 步骤很简单: 安排96孔板的加样位置 配制反应体系(Sybr green mix 10uL;dd water 7uL;正反引物各 1uL) 加cDNA样 1uL 上机 (视频里用到的cDNA量跟上述有些许差异,可根据自己实验调整) 5.q-PCR数据分析 数据分析思路:...
在分析RNA表达水平时，常用的方法是首先将RNA反转录为cDNA，然后进行qPCR扩增。我将介绍RNA反转录为cDNA...
一般进行定量PCR的目的,是为了进行mRNA的表达量分析,或者对RNA拷贝数进行定量,或者确定RNA病毒是否存在的定性分析,那么首先都需要进行反转录实验,将RNA反转录为cDNA。 本文为您介绍反转录实验相关的一些基础概念。 RNA模板 RNA操作的注意 制备RNA的关键,一是要抑...
为什么qPCR不直接扩增RNA？1、RNA的不稳定性：RNA分子比DNA分子更不稳定，更容易被细胞内的RNA酶降解。直接扩增RNA可能会增加其被降解的风险，导致实验结果的不准确。2、逆转录过程：在qPCR中，通常首先使用逆转录酶将RNA转换成cDNA（互补DNA）。这样，RNA的不稳定性不再是问题，并且cDNA的稳定性和DNA的扩增效率使得...
RNA的纯度直接影响cDNA的合成量,因此提取RNA后需要进行纯度和质量检测。🔍 吸光度测定方法: 在260 nm、320 nm、230 nm、280 nm波长下的吸光度分别代表核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。 OD260/OD280(R)值反映了RNA中蛋白质等有机物的污染程度。质量较好的RNA的R值应在1.8～2.0...
实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验RNA提取、RNA浓度测定和反转录合成cDNA的过程解析睦科生物 立即播放 打开App,流畅又高清100+个相关视频 更多3万 110 4:26 App 实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验qpcr和上机测试的过程解析 5671 7 6:44 App 实时PCR动画演示 4.4万 23 3:02 App 实时定量荧光PCR(Real-time PCR...
最常见的应用之一是通过定量PCR技术(qPCR)分析特定基因的表达水平。通过将RNA逆转录为cDNA并与特定的引物进行杂交,可以精确地测量某一基因在特定生物条件下的表达情况。 除了基因表达分析,RNA与cDNA的杂交还被广泛应用于转录组学研究。通过对大量RNA样本进行逆转录和杂交分析,研究人员可以全面了解细胞或组织中各个基因的...
有cDNA,有dNTP,有残余的oligoDT,还有未完全转录的RNA。很难说清楚到底那里面有多少是cDNA。所以不建议测cDNA的浓度。其实我做实验还发现了一个问题。这个cDNA的浓度是否一致和RNA的质量有关。OD260/OD280越高,有机物污染越少,cDNA就越一致。反之,他们相差很大。 第二个问题,我同意你的观点。每组样品中,只要和...