RNA免疫沉淀RIP实验流程 分离的 RNA 可以通过多种分子方法进行分析，包括终点 RT-PCR 和定量 RT-PCR（如果 RBP 的结合目标已知）、微阵列或深度测序方法。RIP技术应用背景 RNA结合蛋白（RNA binding protein，RBP）是一类功能强大而广泛的调节因子，约占细胞编码的所有蛋白的5%~10%。目前除了少数RNA以核酶形式单独发...
RNA免疫共沉淀—RIP-seq(RNA Immunoprecipititation)是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,RIP利用目标蛋白的抗体将相应的RNA-蛋白复合物(RBP)沉淀下来,分离纯化捕获的RNA,结合高通量测序技术对目标RNA进行测序分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,蛋白结合对象为RNA,RIP-seq即对富集得到的...
答案是肯定的，即RNA免疫共沉淀（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RIP）技术。 在原理上，RIP与ChIP非常相似，可以理解为只是研究对象不同，RIP主要是研究蛋白-RNA间的互作情况。这些RNA可以是mRNA、非编码RNA甚至病毒RNA等。在实验方案和步骤上，RIP也有自身特别需要注意的地方，后面将会一一介绍。RIP实验可...
RIP 是一种研究单个蛋白质和 RNA 分子间物理结合的实验方案。 RIP技术实验流程 RIP实验基本原理 1、用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的 RNA 结合蛋白。 2、防止非特异性的 RNA 的结合。 3、免疫沉淀把 RNA 结合蛋白及其结合的 RNA 一起分离出来。 4、结合的 RNA 序列通过 microarray(RIP-Chip...
至此,我们介绍了IP、Co-IP、ChIP、RIP这一系列的免疫沉淀技术,它们的基本原理都是基于抗原-抗体特异性结合实现的,然后根据研究对象的不同,细分出了不同的方法。除此之外,有时候我们还会见到pull-down实验,例如GST pull-down、RNA pull-down,这种又是什么实验?跟前面介绍的几种免疫沉淀又有什么联系和区别呢?下期...
实验过程中应该保持有一个或多个阴性对照,例如无抗体的样品或敲除细胞或组织的免疫沉淀.不建 议将敲低细胞用于阴性对照实验. 2 细胞核分离和裂解物沉淀 2.1. 2,500 g 离心 15 分钟沉淀细胞核. 2.2. 将细胞核沉淀重新悬浮于新鲜制备的 RIP 缓冲液 (1 mL) 中. 为避免污染,使用不含 RNA 酶的试剂,如不含...
▲提取RNA:于每管上清液中加入250 μl RIP Wash Buffer,再加入400 μl苯酚:氯仿:异戊醇(125:24:1),涡旋震荡15秒,室温下以14000 rpm离心10分钟。小心吸取上层水相,重复氯仿抽提一次,最后加入无水乙醇沉淀RNA。 ▲清洗与溶解:用80%乙醇清洗沉淀,晾干后重新悬浮在10到20 μL的无RNase的水中,并置于-80℃保存。
RIP(RNA结合蛋白免疫沉淀)是研究体内 RNA 与蛋白结合情况的技术,主要包括RIP-qPCR和RIP-seq两种;其中RIP-qPCR用来验证与目标蛋白结合的已知RNA,RIP-seq用来筛选与目标蛋白结合的未知RNA。 2、 实验流程 3、 样品要求 1) 动物组织样品:>100mg (黄豆粒大小) ...
RIP可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBP(RNA结合蛋白)的互作关系等。 三、RIP技术的操作步骤 1、样本制备-细胞/组织裂解 2、免疫沉淀 3、RNA提取及逆转录制备cDNA 4、下游分析 注意: 1、RIP实验操作全程都要注意样品内源或操作环境中RNA酶的影响 2、RIP实验抗体至少为IP级 ...
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。分析与目的蛋白结合的RNA.运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析;即用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白,防...