提取的细菌RNA质量需通过分光光度计检测其浓度和纯度。 电泳分析可直观看到细菌RNA的完整性情况。PCR反应体系包含模板DNA、引物、dNTP、Taq酶等成分。引物设计是PCR成功的关键,要考虑其特异性和Tm值。Taq酶具有热稳定性,能在高温下催化DNA合成。dNTP为PCR提供合成DNA所需的原料。PCR扩增的循环次数一般在25 - 40次...
RNA提取的一般步骤是:破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA 破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行,可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织,加入β-ME可以抑制RNA酶活性。 分离RNA一半用酚、氯仿等有机溶剂,加入少量异戊醇,经过此步,离心,RNA一般分布于上层,与蛋白层分开。 沉淀RNA一...
DNA(PCR)只能证明有这个基因，不能证明这个基因表达与否，只有RNA(RT-PCR)才能看出基因表达与否。二者排列组合可以出现3种情况：（1）DNA与RNA都阳性，说明有这个基因，并且目前表达。（2）DNA阳性，RNA阴性，说明有这个基因但目前不表达。（3）DNA阴性（不应写成“DNA表达阴性”）而RNA表达阳性，如果做...
总RNA逆转录成cDNA 一、仪器及试剂: 仪器:低温高速离心机;高精度加样器及枪头:0.5-10uL、20-200uL、200-1000uL;EP管等 试剂:RevertAid™First Strand cDNA Synthesis Kit。 样品:大鼠总RNA。 二、实验步骤: 1.冰上充分溶解逆转录试剂盒中的相关试剂和RNA。 2.取PCR管,冰上依次加入以下试剂: Oligo(dT)1...
问题的提出:试题中出现了提取 为模板,逆转录成DNA,再进行PCR扩增目的基因。填空的答案为总RNA还是mRNA,个人觉得填总RNA更合适一点,如果要填mRNA,需要“提取和纯化”的表述,也就是说,提取的是总RNA,分离纯合后得到某种mRNA。那么,如何...
在RT-PCR中，逆转录酶将RNA转化为cDNA，以便进行后续的PCR扩增。聚合酶链式反应 PCR是一种在体外快速、特异地扩增DNA片段的方法。在RT-PCR中，PCR用于扩增由逆转录酶合成的cDNA，从而获得所需的基因片段。所需试剂和材料 总RNA提取试剂：用于从细胞或组织中提取总RNA。逆转录酶：用于将RNA转化为cDNA。02 ...
视频地址: 实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验RNA提取、RNA浓度测定和反转录合成cDNA的过程解析 文青二狗子 粉丝:48文章:14 关注分享到: 投诉或建议 评论0 最热 最新 请先登录后发表评论 (・ω・) 发布0 0 0 0 登录哔哩哔哩,高清视频免费看! 更多登录后权益等你解锁...
第一节 核酸结构和特性 核酸是核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)的统称。 核酸是生命的最基本物质之一,是所有已知生命形式必不可少和最重要的组成物质,它广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,控制生物的遗 传…
植物总RNA的提取和RT-PCR.ppt,一、实验目的: 1、学习植物总RNA提取的原理及其操作过程。 2、学习 RT-PCR 的原理及其操作过程。 二、RNA提取的一般原理 RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓
2733 -- 1:37 液氮冷冻法破碎细胞提取植物RNA--加液氮并研磨的过程 1.3万 3 2:35 手把手教你做实验_基因组DNA提取 43.4万 6161 24:28:21 【南京大学】分子生物学 1.2万 46 26:39 切胶,胶回收,PCR产物回收——分子生物学实验教程,生物化学实验教程 1984 -- 0:41 逆转录实验中,怎么做能尽量避免...