首先，需要利用特异性抗体来捕获目标蛋白质，从而实现对蛋白质-RNA复合物的有效富集。随后，通过一系列的检测与分析手段，如qRT-PCR或高通量测序等，来深入研究这些复合物中的RNA成分，进而揭示分子间的相互作用关系。同时，对于复合物中的蛋白质成分，也可以采用WB或质谱等技术进行分离和检测，以进一步评估目标蛋白质抗...
(RIP)是研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,可应用于miRNA调控靶点、RNA 与RBPs(RNA结合蛋白)互作等研究。 1.实验原理: RIP技术运用针对目标蛋白的抗体免疫沉淀相应的RNA-蛋白复合物,并纯化与蛋白结合的RNA。最后,结合基因特异性分析技术(PCR、qRT-PCR)或高通量分析技术(高...
RIP技术基于靶标蛋白的特异性抗体，用于免疫沉淀相应的RNA-蛋白复合物。随后，通过纯化步骤分离出与蛋白结合的RNA。最后，结合基因特异性分析技术，如PCR、qRT-PCR，或高通量分析技术，如高通量测序、基因芯片，对复合物上的RNA进行深入分析。默克公司为科研人员提供了多种类型的RIP试剂盒，以满足不同的研究需求。其中...
理论上可以,但需使用能分别抽提核浆蛋白的蛋白抽提kit,且试剂不能有RNase和DNase,且要与下游的抗体beads孵育兼容。 4️⃣ RIP实验完成后得到的是RNA序列,如何进行后续检测? 常见的检测方法是real time qRT-PCR。如果对照的目的是保证两个样品间加入的细胞量一致或进行定量,可以使用input作为判别,计算不同样品上样...
RIP 运用针对目标蛋白的抗体沉淀相应的 RNA-蛋白复合物,经过RNA分离纯化,然后逆转录或 构建 cDNA 文库,最后利用基因特异性分析技术(PCR、qRT-PCR)或高通量分析技术(高通量测序、基因芯片),分析结合在复合物上的 RNA 类型及数量。 RIP 可应用于的研究领域包括: ...
室温晾干后,加入20ul DEPC水溶解,测溶度后进行后续qRT-PCR检测。 MeRIP实验步骤: 提取总RNA:首先提取细胞中的总RNA。 抗体拉RNA:用修饰抗体拉取特定RNA。 清洗Beads:用NT2 buffer清洗beads,并进行后续操作。 提取RNA:提取beads上的RNA,并进行测序或qRT-PCR验证。
常见的用real time qRT-PCR。如果对照的目的是保证两个样品间加入的细胞量一致或者进行定量,理论上说,使用input作为判别,计算不同样品上样量的差异。如果对照的目的是为了看IgG以及目的抗体富集的非特异性mRNA的量的话,那么可以找一个确定不会与目的抗体结合的RNA片段设计primer...
RIP 运用针对目标蛋白的抗体沉淀相应的 RNA-蛋白复合物,经过RNA分离纯化,然后逆转录或 构建 cDNA 文库,最后利用基因特异性分析技术(PCR、qRT-PCR)或高通量分析技术(高通量测序、基因芯片),分析结合在复合物上的 RNA 类型及数量。 RIP 可应用于的研究领域包括: ...
该试剂盒提供了所有必要的试剂,以富集RNA结合蛋白特异性RNA复合物,通过qRT-PCR或NGS从各种细胞样本中分析蛋白质-RNA相互作用。在这个检测中,细胞被渗透处理,并用针对感兴趣蛋白的RIP级抗体处理。然后,一种独特的核酸裂解酶混合物选择性地切割目标蛋白区域周围的RNA序列,移除非特异性RNA-蛋白复合物。只有抗体结合的复合...
常见的用real time qRT-PCR。如果对照的目的是保证两个样品间加入的细胞量一致或者进行定量,理论上说,使用input作为判别,计算不同样品上样量的差异。如果对照的目的是为了看IgG以及目的抗体富集的非特异性mRNA的量的话,那么可以找一个确定不会与目的抗体结合的RNA片段设计primer进行qPCR,用来看IgG以及目的抗体拉下来...