知识 游戏 二次元 音乐 美食 展开 RIP实验结果解读,RIP后WB和qPCR怎么看? RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。该技术主要是运⽤目标蛋⽩的特异性抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离...
RIP(RNA免疫沉淀)拉出来的RNA理论上没有内参基因,是怎么算出%of input的呢?赞 回应 转发 赞 收藏 只看楼主 昨夜风吹 2021-09-14 20:29:11 我记得sigma 公司有张计算表 赞 回应 这是响亮的茗子 (不要总是向后仰他会让你怅然若失) 2021-09-19 16:44:23 姐妹!给技术打电话哈! 他们讲的很...
7.4 qPCR结果 例如: 结果说明:通过RIP-qPCR验证circRNA和FOXA1/TET1互作。 本次实验的目的是使用RIP-seq或者RIP-qPCR的方法,通过在目的细胞中运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的RNA进行测序或qPCR分析,寻找目标蛋白的互作RNA分子,或在不同遗传背景或处理条件下的...
在qPCR管中配制如下混合液 2.按下列条件进行qPCR反应 七、实验结果 7.1抗体在细胞样本中表达验证(质控1) 例如: 结果说明:目的蛋白在目的样本中表达正常,说明抗体有效,样本中蛋白没有发生降解,可进行后续RIP实验。 7.2RIP-WB验证(质控2) 例如: 结果说明:目标蛋白的抗体把自身蛋白特异性沉淀下来,说明该抗体可以进行I...
2.1 Western检测结果 目的蛋白在目的细胞中有表达,条带大小正常,可用于后续实验。 2.2 qPCR原始数据及数据处理 详见原始数据excel表:RIP-QPCR数据 2.3柱状图 阳性对照: 结果说明:阳性对照实验:U1C蛋白免疫共沉淀,qPCR检测RNA U1的量。阴性对照为IgG蛋白免疫共沉淀,qPCR检测RNA U1的量。 图片说明: 在XXX细胞中,XXX...
RIP结果pcr分析 Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点,real-time qPCR由于其操作简便,灵敏度高,重复性好等优点发展非常迅速。设在已经涉及到生命科学研究的各个领域...
7. **qPCR检测**：- 通过qPCR验证RNA结合的特异性。8. **数据处理**：- 使用ΔΔCt法计算结合效率，计算示例包括输入量的百分比计算。实验结果包括Western检测结果验证目的蛋白表达，qPCR原始数据及处理结果，柱状图展示阳性对照和阴性对照实验，说明目的蛋白能特异性结合靶标RNA。
首先，从细胞中收集样本。然后，通过交联剂稳定RNA与蛋白质的相互作用。裂解细胞释放RNA和蛋白质，加入特异性抗体进行免疫沉淀，富集目标RNA结合的蛋白质复合物。洗涤步骤去除非特异性结合的物质，高温或酶处理去除交联。接下来，提取富集的RNA，通过PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）、Northern Blot等方法验证目标...
实验验证：使用PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）、Northern Blot等方法验证富集的RNA是否包含目标RNA。3、注意事项 使用已验证的特异性抗体，进行抗体效力验证是至关重要的。保持细胞样本高质量，避免RNA降解和蛋白质失活。控制实验条件，确保实验的可重复性和一致性。保持洁净的实验室技术，以防止污染对实验结...
实验材料与试剂试剂：RIP试剂盒（Millipore 17-701）、PMSF（Genstar B111-01）、磷酸酶抑制剂（Selleck B15001）、蛋白酶抑制剂（Selleck B14001）、反转录试剂盒（TAKARA RR037A）、qPCR试剂盒（yeasen 11202ES03）仪器：高速离心机（Enppendorf 5810R）、荧光定量qPCR仪（Thermo Fisher Scientific ViiA...