RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同,如:RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等。 RIP-seq RIP-seq(RNA immunoprecipitation and high-throughput sequencing)是RNA免疫沉...
1、实验原理 RIP技术(RNA Binding Protein lmmunoprecipitation, RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。该技术主要是运用目标蛋白的特异性抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化对结合在复合物上的RNA进行q-PCR验证或高通量测序分析。 2、...
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基于circRNA下拉实验,miR-197-3p可以特异性地结合circNUP50。RIP实验显示,与IgG组相比,Ago2组中circNUP50和miR-197-3p的富集量增加。RNA FISH实验显示,circNUP50和miR-197-3p在细胞质中共同定位。 当过表达miR-197-3p时,SKOV3/DDP细胞和A2780/ DDP细胞增殖减少、被阻滞在细胞周期的G0/G1期以及细胞的凋亡率...
2、6T为6次单组(1组IP或1组IgG)免疫沉淀实验,后面的操作步骤中包含了IgG和IP各1组,需消耗2T试剂。 使用方法 1、样本裂解 1.1动物细胞 (1)准备405uL Complete RIP Lysis Buffer (400uL RIP Lysis Buffer+4uL Protease Inhibitor (100×)+ 1uL RNase Inhibitor); ...
RIP实验优势 a）取材可以选择该目的蛋白所在物种、特定模型细胞，因此RIP能够反应RNA-蛋白在天然细胞状态下存在的互作关系；b）找出RBP直接/间接互作的RNA，研究复合体组成；c）RIP-q-PCR验证RNA pull down-MS筛选的蛋白，避免假阳性。RIP实验注意事项 a）抗体：RIP实验需要IP级别抗体（也可以是标签抗体）b）样品：...
1.RIP、COIP等表观实验需要用到的各种试剂我司都有配制出售,有需要的朋友可以联系购买哈。2.如期生物“生物技能培训班”正式接受报名,所有课程都是一对一进行;重点是:培训不是理论授课,而是通过实验操作的实践模式完成。课程囊括:qPCR、WB、ELISA、COIP、CHIP、RIP、RNA pull down 、DNA pull down等项目,有需要的...
一、实验流程图 二、RIP实验流程 (一). 细胞裂解液获取 A. 单层细胞或者贴壁细胞处理 1. 冷PBS清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次 2. 加入冷PBS后用细胞刮将细胞刮下来,收集至enpendoff管 3. 1500rpm,4℃离心5min,弃上清,收集细胞 4. 用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞,吹打均匀后于冰上静置5min ...
实验操作流程图 图源:合作品牌商 对照设置流程图 相关试剂 操作步骤 RIP 实验需要注意什么? 1. 防止 RNA 与蛋白非特异性结合; 2. 避免 RNA 蛋白质 结合被破坏; 3. 避免外源 RNase 污染; 4. 抑制内源 RNase 的活性; 5. 选择适合做 RIP 的抗体; ...
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