六、 qPCR检测在qPCR管中配制如下混合液2.按下列条件进行qPCR反应七、实验结果7.1抗体在细胞样本中表达验证(质控1)例如:结果说明:目的蛋白在目的样本中表达正常,说明抗体有效,样本中蛋白没有发生降解,可进行后续RIP实验。7.2RIP-WB验证(质控2)例如:结果说明:目标蛋白的抗体把自身蛋白特异性沉淀下来,说明该抗体可以进行IP
2.1 Western检测结果 目的蛋白在目的细胞中有表达，条带大小正常，可用于后续实验。2.2 qPCR原始数据及数据处理 详见原始数据excel表：RIP-QPCR数据 2.3柱状图 阳性对照：结果说明：阳性对照实验：U1C蛋白免疫共沉淀，qPCR检测RNA U1的量。阴性对照为IgG蛋白免疫共沉淀，qPCR检测RNA U1的量。图片说明：在XXX细胞中...
RIP实验的流程可以简单归纳为：收集细胞；分离并裂解细胞核；剪切片段化染色质；将所研究的 RNA 结合蛋白 (RBP) 和结合的 RNA进行免疫沉淀；洗涤、纯化免疫沉淀后 RBP 上结合的 RNA；；将 RNA 逆转录为 cDNA，通过 qPCR、微阵列或测序进行分析 具体实验操作如下：制备细胞裂解液（自然沉淀法）a)收集细胞(汇合度...
0检测 使用逆转录DNA酶处理RNA，将其逆转录为cDNA后进行分析。这一步骤将为我们提供关于目标蛋白质与RNA相互作用的具体信息。若已知特定靶标，则利用qPCR对cDNA进行定量分析。若未知靶标，则通过构建和测序cDNA文库来进行深入分析。至此，RIP实验的基本流程已介绍完毕。愿您的研究顺利，晶世特生物始终与您同行，提供RI...
五、QPCR检测 ▲配制反应体系:根据qPCR实验要求配制反应体系。 ▲RT反应:将RNA样品进行逆转录反应,生成cDNA。 ▲qPCR检测:将cDNA样品进行qPCR检测,分析目标RNA的表达情况。 六、实验后篇章:数据分析,洞见未来 1. RNA质量检测与测序 对提取的RNA进行质量评估,确保无降解且纯度达标。随后,可采用高通量测序技术(如RNA-...
RIP实验的流程可以概括为以下几个步骤：首先，收集细胞并制备细胞裂解液；其次，将细胞裂解液与目的RNA结合蛋白和抗体混合，进行免疫沉淀；然后，洗涤并纯化免疫沉淀后的RNA；最后，将RNA逆转录为cDNA，并通过qPCR、微阵列或测序进行分析。在具体操作中，制备细胞裂解液的方法有两种：自然沉淀法和交联法。自然沉淀法包括...
第二种验证性实验，则是已知靶RNA和RBP，通过qPCR对靶RNA产物进行定量、鉴定等分析。当然，可以将探索和验证视为整体的实验，即先寻找、筛选出候选RNA，接着再进一步验证候选RNA与RBP的关系。实际上，这一思路对于Co-IP和ChIP等实验方案设计是通用的。总的来说，RIP可用于研究活细胞中RNA与蛋白的互作关系，揭示RNA...
RIP-qPCR验证要点: (1)实验设计:尽量进行实验组别设计和生物学重复检测,提高后续验证的阳性率。常规过表达单组(Ab IP vs IgG IP);动态互作组学(实验组vs对照组vs IgG组)。根据目的设计适当的生物学重复。如果后续以RIP-Seq数据进行互作组标准分析,则需要3-4组生物学重复;如果后续以寻找关键互作RNA,进行深入的...
K。于55 °C孵育30min。6. 加入1ml trizol 进行RNA提取（并用6ug糖原沉淀RNA）。7. 用等体积的RNA进行反转录及qpcr检测（如果10%input的RNA浓度过高，可稀释10至1%input 进行反转录）(由于RNA提取与qPCR分析为常规使用操作，在此次就不再细讲，有需要的详细了解的朋友可以私聊讨论哈-如期生物）
寻找与该蛋白质结合的RNA。RIP（RNA免疫共沉淀）属于后者，利用特异性的抗体捕获样本中的目标蛋白，那么与目标蛋白结合的RNA也一并被捕获，之后通过qPCR或者测序技术来确定这些结合的RNA。以上是辉骏生物关于RNA免疫沉淀(RIP)、RIP实验流程、RIP技术背景应用的相关介绍，若有错误还请指正！~