通过cyclin A等蛋白的抗体去做RIP,然后通过PCR来检测circ-Foxo3,结果如下图: 三、服务内容 1.服务流程 2. 宗旨理念 a. 实验过程及结果承诺客观真实,原始数据全部反馈给客户。 b. 实验过程全部有据可循,拍照留存,实验数据能够保证真实有效。
3、q-pcr数据处理 (ΔΔCt法) ΔCt [normalized IP] = (Ct [IP] - (Ct [Input] -Log2 (Input Dilution Factor))) % Input = 2 ^(-ΔCt [normalized IP])*100% 我们的input通常为总量的1/10,即稀释了10倍,Log2 (Input Dilution Factor)≈3.3 计算示例: input U1C U1 14.05 17.55 ΔCt=17.5...
文章中通过cyclin A等蛋白的抗体去做RIP,然后通过PCR来检测circ-Foxo3,所以结果的展示形式是柱状图: 二、实验流程 本文以模式生物黑腹果蝇S2细胞为研究对象,对RIP 技术(RNP免疫沉淀)进行优化。 材料与试剂准备 所有试剂均需用超纯水配制; 整个实验使用玻璃和塑料制品,不含DNase和RNase; 所有溶液通过0.2μm过滤器(微...
GenSeq(R) RIP试剂盒专为RIP实验设计,包含了RIP流程中的所有**试剂,如:细胞裂解液、蛋白A/G磁珠、IP和洗脱缓冲液、蛋白酶抑制剂、Rnase抑制剂等。优化过的实验流程极其简洁和高效,RIP实验后得到的RNA可以广泛应用于后续的定量RT-PCR(RIP-qPCR)、高通量测序(RIP-Seq)以及其它检测分析。
文章中通过cyclin A等蛋白的抗体去做RIP,然后通过PCR来检测circ-Foxo3,所以结果的展示形式是柱状图: 二、实验流程 本文以模式生物黑腹果蝇S2细胞为研究对象,对RIP 技术(RNP免疫沉淀)进行优化。 材料与试剂准备 所有试剂均需用超纯水配制; 整个实验使用玻璃和塑料制品,不含DNase和RNase; 所有溶液通过0.2μm过滤器(微...
损的RNA样品,可以进行PCR或聚丙烯酰胺凝胶电泳来验证RNA的完整性和大小。RNA存在提取锅里表皮脱落和污染问题,若遇到部分这 种偏差能够显著降低 RNA 活性。该步骤的重要性不可忽略。 总体而言,RIP实验是一项操作繁琐但结果具有高可信度的实验。在实验的每个环节都必须格外仔细以减少失误发生的可能性。最终,通过正确的实...
3. 定量PCR检测 1) 将Mix在4℃下融解,轻柔地上下颠倒混匀并进行短暂离心。 2) 冰上配制下表中的反应液 3)将反应管进行短暂离心,确保所有反应液在反应孔底部。 4)采用三步法程序进行反应: 5实验结果 a.抗体验证结果 a.qPCR验证结果及电泳图 qPCR检测结果(详细数据见附件excel”MTOR-RIP数据分析结果”) ...
点击这里链接至技术文章《RIP实验常见问题》 结果分析 对于一幅RIP-qRT-PCR实验结果Figure,应包含位点作用示意图、qRT-PCR结果数据分析图,并应在Supplement中补充相关的验证性实验图片,具体如下图所示。 RNA与蛋白绑定结合位点。经过一定处理,RNA原本以双链茎环结构,不结合RBP蛋白和miRNA,经过处理后茎环结构打开,一条...
6.取下PCR管。用180 μL无核酸酶水(稀释10倍)稀释产物。产物可以存储在-20°C。六、 qPCR检测在qPCR管中配制如下混合液2.按下列条件进行qPCR反应七、实验结果7.1抗体在细胞样本中表达验证(质控1)例如:结果说明:目的蛋白在目的样本中表达正常,说明抗体有效,样本中蛋白没有发生降解,可进行后续RIP实验。7.2RIP-WB...