Co-IP实验原理示意图 实验对照设置 为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用,而不是由于某些方面造成的人工相互作用(也就是“假阳性”),在Co-IP的实验设计过程中,需要设置正确的对照。假设Co-IP实验的实验组为“磁珠+抗X抗体+靶蛋白X+目的蛋白Y”,则可能出现的“假阳性”及对应需要设置的实验对照如下表所...
RIP技术原理 RIP的实验原理和CHIP类似，是利用某一蛋白的抗体，将目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以捕获和目标蛋白互作的RNA分子，再对捕获的RNA进行定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来进行鉴定。RIP实验当前已经衍生出很多方法，可以主要分为两大类，自然沉淀法（Native methods...
RIP 实验基本原理: 1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。 2. 防止非特异性的RNA的结合。 3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。 4.结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。 延伸阅读:95%的人类基因组并不编码基因,...
RIP 实验基本原理 (1)用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。 (2)防止非特异性的RNA的结合。 (3)免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。 (4)结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
ChIP、RIP、RNA-pull-down、EMSA、Luciferase原理搜索 1 C hP IP 实验 通过与染色质片段共沉淀与PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合得DNA片段。将处于适当生长时期得活细胞用甲醛交联后将细胞裂解, 染色体分离并打碎为一定大小得片段 200bp-1000bp;然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与 DNA 交联得复合物, 对特定靶...
ChIP、RIP、RNA-pull-down、EMSA、Luciferase原理 1 ChIP实验 通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。将处于适当生长时期的活细胞用甲醛交联后将细胞裂解, 染色体分离并打碎为一定大小的片段200bp-1000bp;然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与 DNA交联的复合物, 对特定靶蛋白与DNA片段...
免疫沉淀(ip)实验:CoIP、RIP、CHIP的区别 IP实验原理 IP又称免疫沉淀(Immunoprecipitation),是利用抗原和抗体的特异性结合以及“proteinA/G”特异性结合到抗体的FC片段的现象开发出来的方法,简单来说,抗原与抗体类似于锁和钥匙之间的关系,一把钥匙(抗体)只能开一把锁(抗原),而钥匙可以通过钥匙链(细菌蛋白的“...
RIP技术的原理与CHIP相似 都是利用蛋白抗体来捕捉RNA-蛋白复合物。经过纯化后，我们可以捕获到与目标蛋白互作的RNA分子，并通过定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）等方法对这些RNA进行鉴定。此外，RIP实验已经发展出多种方法，主要包括自然沉淀法和交联RNA免疫沉淀两大类。自然沉淀法虽然能够模拟细胞内的自然环境，让...
在原理上，RIP与ChIP非常相似，可以理解为只是研究对象不同，RIP主要是研究蛋白-RNA间的互作情况。这些RNA可以是mRNA、非编码RNA甚至病毒RNA等。在实验方案和步骤上，RIP也有自身特别需要注意的地方，后面将会一一介绍。RIP实验可根据目的分为两种情况，一种是探索性实验，另一种是验证实验。具体讲，第一种是靶RNA未知...