CoIP、CHIP和RIP这些技术之间的差异主要在于与抗体结合的物质。CoIP中的B代表蛋白质,CHIP中的B代表DNA,而RIP中的B则代表RNA。 01 CoIP技术 CoIP技术利用抗体的特异性反应来纯化和富集目标蛋白质。具体流程如下:先将抗体与细胞裂解液或表达上清中的相应蛋白结合,再与蛋白A/G偶联的琼脂糖或Sepharose珠子进行孵育。通过...
RIP主要是运用抗目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序分析。RIP 是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,可以帮助我们发现miRNA 的调节靶点。 RIP技术原理 RNA免疫沉淀常用来研究mRNA的转录与转录后的...
RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)。RIP技术下游结合microarray技术(微阵列)被称为RIP-Chip,帮助我们更高...
IgG组:IgG抗体拉取组,为阴性对照组; 下面我们来看RIP 原理跟ChIP差不多,只是需要在操作时额外注意RNA的降解问题,也不用对细胞进行交联固定。仍然是用常用语给大家描述一下上图,即在细胞裂解液中用目的蛋白的IP级别抗体去下拉所有的可能结合的RNA并进行纯化,之后可利用qPCR、测序等检测技术进行RNA产物的分析鉴定。
CHIP与RIP的区别 1. 目标核酸：a. CHIP：研究蛋白质与DNA的相互作用。b. RIP：研究蛋白质与RNA...
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)主要原理是根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白(即抗原)分离出来,只是为了检测某一种蛋白的表达情况。co-IP、ChIP、RIP等技术由IP演化而来,可以用来研究与蛋白结合的分子。 二、免疫共沉淀技术(co-Immunoprecipitation, co-IP) ...
通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的DNA的方法即为ChIP; 通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的RNA的方法即为RIP; 通过IP的方法富集蛋白,检测与其结合的蛋白的方法即为coIP; 到这里,我想大家都已经明白了三者的区别了,接下来我们来分别深入学习一下~ 我们先来看ChIP ...
免疫沉淀(ip)实验:CoIP、RIP、CHIP的区别 IP实验原理 IP又称免疫沉淀(Immunoprecipitation),是利用抗原和抗体的特异性结合以及“proteinA/G”特异性结合到抗体的FC片段的现象开发出来的方法,简单来说,抗原与抗体类似于锁和钥匙之间的关系,一把钥匙(抗体)只能开一把锁(抗原),而钥匙可以通过钥匙链(细菌蛋白的“...
想要深入了解细胞的生命活动,对于基因-蛋白,蛋白与蛋白之间的相互作用的认识是很有必要的,尤其是想揭示隐藏在表象下的调控机理,发表一篇比较不错的文章。说到基因,蛋白互作,就绕不开IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down这几个基本的实验技术。他们之间既有联系又有区别,那么今天就跟随博主一起理清它们的丝丝缕缕。
而CoIP、CHIP、RIP的区别在于它们寻找的B是什么。CoIP的B是一种蛋白质，CHIP是DNA，RIP是RNA。CoIP，即免疫共沉淀，利用抗原A与蛋白B结合。通过A的抗体（钥匙）沉淀A（锁），使用精制的prorein A（钥匙链）吸附抗原，从而获得抗原A与蛋白B的复合体，对B进行检测，获取蛋白质与蛋白质相互作用的信息。...