Real Time PCR(qPCR),即实时荧光定量核酸扩增检测系统,是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术,是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、精确以及使用简便等优点,现已发展...
实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。① 荧光染料法（SYBR Green）：SYBR G...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR...
05实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR, RT-qPCR) Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合。 PCR反应体系主要包含以下五种成分:模板(template)、引物(primers)、底物(dNTP)、DNA聚合酶、PCR缓冲液(PCR buffer)。 总结 PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR这四种技术都是基于聚合酶链式反应(PCR)的技术,主要区别...
Real-time qPCR数据分析 基线（baseline)：通常是3－15个循环的荧光信号，同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线。阈值（threshold)：自动设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。手动设置：置于指数扩增期，刚好可以清楚地看到荧光信号明显增强。同一次反应中针对不同的基因可单独设置阈值，但对于同一个基因...
Real-time qPCR ,即实时荧光定量核酸扩增检测系统,是一种利用荧光染剂检测每次 PCR 循环后产物总量的方法技术,是常规 PCR 的衍生反应。 因其具有灵敏、特异、精确以及使用简便等优点,现已发展成为分子生物学研究中的重要工具。 很多没有做过的研究者常常感到高深莫测,不知从何入手;甚至一些做过次实验的研究者也会...
Agilent Real-time qPCR 检测 操作手册说明书 Real-time qPCR 检测操作手册 1/ 6
Real-time qPCR中最常用的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5'端标记荧光基团,3'端标记淬灭基团。TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。