实验概述 RT-PCR的原理就是采用荧光基团标记的特异性探针来跟踪PCR产物,全程监控,后期结合电脑软件分析定量得出待测样品的初始量。SYBR Green I是一种DNA小沟结合染料,游离时不发光,与DNA结合是发光。 RT-PCR、Real-time PCR、QPCR、real-time Q-PCR的区别 RT-PCR,即逆转录PCR(re...
Real-time PCR的原理和技术要点是什么?原理:在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:1)TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引...
实时PCR基于聚合酶链反应原理,通过扩增目标DNA或RNA序列来检测其存在。实时PCR使用一对特异性引物,即前向引物和反向引物,与目标序列的两侧结合。在反应过程中,DNA聚合酶会复制模板DNA,并在每个引物的结合位点依次合成新的DNA链。 然而,与传统PCR不同的是,实时PCR在反应混合物中加入了一种叫做探针的荧光探测剂。这种...
3)PCR-ELISA法: 利用地高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗地高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的〔6〕。 2.内标在传统定量中的作用 由于传统定量方法都是终点检测,即PCR...
Real-timePCR实验原理 实时荧光定量PCR技术概述 1 实时荧光定量PCR技术是一种在PCR反应过程中，通过荧光信号的实时监测，对DNA进行定量分析的方法。2 该技术结合了PCR的高特异性和荧光探针的高灵敏度，实现了对DNA的快速、准确和动态的定量检测。3 实时荧光定量PCR技术在生物学、医学、农业和环境科学等领域具有广泛的...
通过PCR反应生成双链DNA,SYBR®Green I与双链DNA结合发出荧光,通过检测荧光不但可以检测反应体系中的DNA扩增量,同时还能测定扩增产物的DNA融解温度。具体原理见下图。 嵌合荧光染料法原理图 ■双标记荧光探针法 双标记荧光探针法是使用5’端带有荧光物质(如:FAM等),3’端带有淬灭物质(如:TAMRA等)的双标记荧光探针...
3)PCR-ELISA 法: 利用地高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗地高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使 底物显色。常规的 PCR-ELISA 法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的〔6〕。 2.内标在传统定量中的作用 由于传统定量方法都是终点检测,...
1、实时荧光定量PCR原理及其定量方法实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR原理和定量方法原理和定量方法一、荧光定量一、荧光定量PCRPCR的原理的原理 在在PCRPCR反应体系中加入反应体系中加入荧荧光基团光基团,利用荧光信号累积,利用荧光信号累积实现了实现了实时监测实时监测整个整个PCRPCR进程,进程,对对起始模板起始模板进行定量...