real-time pcr原理 实时聚合酶链反应(real-time PCR)是一种广泛应用于分子生物学研究中的技术,用于检测和定量DNA或RNA的存在。与传统聚合酶链反应(PCR)相比,实时PCR能够提供更快、更准确的结果。 实时PCR基于聚合酶链反应原理,通过扩增目标DNA或RNA序列来检测其存在。实时PCR使用一对特异性引物,即前向引物和反向...
原理:在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:1)TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该...
现将其原理简述如下: 1)TaqMan荧光探针: PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而...
一.实时荧光定量 PCR 原理 所谓实时荧光定量 PCR 技术,是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行 定量分析的方法。 1.Ct 值的定义 在荧光定量 PCR 技术中,有一个很重要的概念 —— Ct 值。C 代表 Cycle,t 代表 threshold,Ct 值的含义是:每...
real-time pcr引物设计原理 实时聚合酶链式反应(Real-time PCR)引物设计原理主要包括以下几个方面: 1.引物长度和碱基序列选择: 引物通常由20-25个碱基组成,并且应尽量避免区域内存在重复序列或剪切位点。引物的碱基序列应根据靶标基因的DNA序列进行设计,确保与目标DNA序列特异性结合。 2. GC含量和熔解温度选择: ...
通过PCR反应生成双链DNA,SYBR®Green I与双链DNA结合发出荧光,通过检测荧光不但可以检测反应体系中的DNA扩增量,同时还能测定扩增产物的DNA融解温度。具体原理见下图。 嵌合荧光染料法原理图 ■双标记荧光探针法 双标记荧光探针法是使用5’端带有荧光物质(如:FAM等),3’端带有淬灭物质(如:TAMRA等)的双标记荧光探针...
Real-timePCR实验原理 实时荧光定量PCR技术概述 1 实时荧光定量PCR技术是一种在PCR反应过程中，通过荧光信号的实时监测，对DNA进行定量分析的方法。2 该技术结合了PCR的高特异性和荧光探针的高灵敏度，实现了对DNA的快速、准确和动态的定量检测。3 实时荧光定量PCR技术在生物学、医学、农业和环境科学等领域具有广泛的...
实时定量PCR技术的出现使分子诊断领域发生重大的变化,目前已广泛地应用于mRNA表达的研究、DNA拷贝数的检测、单核苷酸多态性的测定、细胞因子的表达分析、肿瘤酎药基因表达的研究以及病原体感染的定量监测等。 二、概念及原理 (一)两个重要的概念 1.荧光阀值 荧光阈值( threshold)是在荧光扩增曲线指数增长期设定的一...