RACE即cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends),是一种基于逆转录PCR从样本中快速扩增cDNA的5′端及3′端的技术,由Frohman等人于1988年发明。利用RACE可以通过已知的部分cDNA序列来得到完整的cDNA的5′和3′端。RACE的特点是在仅已知单侧序列可供设计特异性引物时,应用RACE
RACE-PCR RACE-PCR实验步骤 一、总RNA提取 二、RACE-Ready cDNA合成 1.准备Buffer混合物,每10微升体系所需如下,在Ep管内混合,离心,室温放置。 2.0微升5×First-Strand Buffer 1.0微升DTT(20mM) 1.0微升dNTP Mix(10mM) 总体积4.0微升 2.在独立的Ep管内加入试剂如下,3'RACE和5'RACE分开 5'RACE ...
它的核心是利用已知的基因序列信息作为PCR引物设计的基础,通过特定的反向转录和PCR步骤,扩增并确定已知序列上游或下游的未知序列。 RACE关键步骤 实现RACE的关键步骤是制备特定的cDNA模板,这个模板包括在mRNA的5'端或3'端添加特定的适配序列。然后,这些适配序列可以用作锚定PCR引物的靶标,这样就能扩增出包含未知序列的c...
答: 原理:RACE 是采用PCR 技术由已知的部分cDNA 顺序来扩增出完整cDNA5’和3’末端,是一种简便而有效的方法, 又被称为锚定 PCR和单边PCR。 3’RACE的原理 一)加入oligo(dT)17和反转录酶对mRNA进行反转录得到(-)cDNA; 二)以oligo(dT)l7和一个35bp的接头(dT17-adaptor)为引物,其中在引物的接头中有一在...
RACE-PCR，即快速扩增cDNA末端序列，是一种分子生物学技术。它基于PCR技术的原理，但特别适用于5'端的cDNA末端序列扩增，这一过程中涉及到了环化步骤。具体而言，RACE-PCR技术通过环化反应，将单链cDNA转化为双链环状DNA，再利用特异性引物进行PCR扩增，从而实现对cDNA末端序列的快速和准确扩增。该技术广泛...
答: 原理: RACE 是采纳 PCR 技术由已知的部分 cDNA 次序来扩增出完好 cDNA5’ 和 3’尾端 ,是一种简易而有效的方法 , 又被称为锚定 PCR和单边 PCR。 3’ RACE的原理 一)加入 oligo(dT)17 和反转录酶对 mRNA 进行反转录获取 (-)cDNA; 二)以 oligo(dT)l7 和一个 35bp 的接头 (dT17-adaptor) ...
首先根据mRNA3′末端天然存在的Poly(A)尾部设计反转录引物逆转录获得第一条cDNA链。根据已知的cDNA序列设计基因特异性引物(gene specific primer,GSP)合成第二条cDNA链。随后以基因特异性引物(GSP)及正义链3′末端引物作为一对引物,对得到的cDNA链进行PCR扩增,从而得到cDNA的3′端序列(基因特异性引物→3′末端)。
RACE-PCR实验步骤 一、总RNA提取二、RACE-ReadycDNA合成1.准备Buffer混合物，每10微升体系所需如下，在Ep管内混合，离心，室温放置。2.0微升5×First-StrandBuffer1.0微升DTT（20mM）1.0微升dNTPMix（10mM）总体积4.0微升2.在独立的Ep管内加入试剂如下，3'RACE和5'RACE分开5'RACE1.0-2.75微升RNA1.0微升5...
RACE是RapidAmplification ofcDNAEnds的缩写,即cDNA末端快速扩增技术,是一种基于mRNA反转录和 PCR技术建立起来的、以部分区域已知序列为起点,扩增基因转录本的未知区域,从而获得mRNA(cDNA)完整序列的方法,也是快速扩增cDNA5’和3’末端的简单有效的方法。 RACE能解决什么问题?由于RACE技术能够获得全长cDNA,我们可以: ...
与常规PCR相比，RACE仅使用一种特异性PCR引物和第二种非特异性引物，根据需要扩增的区域在cDNA的3’端或5’端来选择第二种引物结合polyA尾巴（3’RACE）还是结合在转录本上（5’RACE）。图 3’RACE原理图。利用mRNA 3’末端的polyA尾巴作为一个引物结合位点，以Oligo（dT）作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA，...