可根据不同样本类型和研究需求为客户提供个性化的文库构建和测序模式,其中包括 RNA+5’RACE,RNA+多重 PCR 和 DNA+多重 PCR 方法,并配合世界领先的生物信息学算法提供可视化数据分析。艾沐蒽通常使用RNA+5’RACE和DNA+多重 PCR文库构建方法,推荐使用RNA+5’RA...
用于cDNA 末端快速扩增的 5´ RACE 系统(版本 2.0)适用于 mRNA 中规定点与 5´ 末端之间的 cDNA 末端快速扩增 (RACE)。5' RACE 系统提供了一组通过资格预审的试剂,用于合成第一链 cDNA、纯化第一链产物、均聚物加尾和制备靶标 cDNA,用于后续 PCR 扩增。提供对照 RNA、DNA 和引物用于监测系统性能。该系统...
首先,5' RACE 测序的原理基于逆转录和PCR技术。首先,RNA通过逆转录酶转录成cDNA,然后使用特定的引物(内引物)与cDNA结合。内引物通常是一个寡聚核苷酸序列,它会与cDNA的末端结合。接着,内引物与cDNA结合后,逆转录酶开始合成第一链cDNA。接着,通过PCR扩增技术,使用内引物和外引物进行扩增,外引物与内引物相结合可以...
5’RACE试剂盒 产品及特点研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点,目前最通用的方 法是 3′-RACE 法,RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是 Frohman 发明的、通过 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技术,它在不建立 cDNA 文库的前提下, 利用已知 cDNA 序列设计引物,通过往两端延伸和扩增获得其 3′...
PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3′或5′末端之间区域的部分cDNA称为快速扩增cDNA末端技术(RACE)。如果已知mRNA的一片段链内短序列,据此或设计基因特异引物,用原先存在的poly(A)尾(3′末端)或附加的同聚尾(5′末端)互补的序列做末端引物,就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDNA序列。为获得5′末端部...
PCR 仪 旋转真空冷冻干燥机(可选择) 水浴箱预设在 75℃ 和 80℃ 二、方法 反转录 在实验开始时,首先要确定 5'-RACE 是否成功。如果反转录步骤是有效的,那么分离到含有靶 mRNA 的 5' 末端序列的克隆的几率是较高的。另一方面,如果反转录步骤是无效的,那么本方案的后续步骤是无法补偿的。因此,对于反转录反应...
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反转录达到第一链的5‘末端时自动加上3一5个(dC)残基,退火后(dC)残基与含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG...
2.2.3.35′ RACE获得5′端序列 根据已知的中间序列设计特异引物Cu3和Cu4,进行5′RACE PCR。过程如下: 1、cDNA纯化 (1)取60μl反转录产物于1.5离心管中,向其中加入5倍体积的结合液PB,充分混匀。 (2)将(1)所得溶液加入吸附柱中,室温放置2 min,12000 rpm离心1 min,弃滤液。 (3)向将吸附柱中700 μl的...
RACE (rapid-amplification of cDNA ends),即cDNA末端快速克隆技术。RACE基于PCR技术基础之上,先由RT-PCR从RNA中获取cDNA片段,再通过设计引物与PCR向两端延伸扩增从而获得完整的3’端或5’端序列,是一种从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5’和3’末端的有效方法。相比于
5'RACE(即cDNA末端快速扩增)法是克隆特定mRNA5'末端的一种快速,灵敏的方法.尤其在基因捕获(Gene-trap)中很有价值,利用5'RACE法能快速,可靠地鉴定被捕捉的外显子.但是,原有的RACE法特异性低,PCR产物在琼服糖凝胶电泳时通常出现成片条带现象;而且多数情况下特异的PCR产物不能用溴化乙锭(EB)染色显示扩增结果,尤其...