我在做4个目的基因和一个内参基因qRT-PCR的标准曲线时,扩增效率全部都超过了120%,最高的甚至达到190%。我现在唯一能确定的就是在加样的过程中不同稀释梯度(10倍的梯度)的模板cDNA在加样过程中有相互污染,所以Ct值也不成线性的变化。我现在就是再重新做并严格避免污染,但是除了我确定的这个原因,还有其他的一些什么原因可能导致
qrt-PCR引物扩增效率0.75，Tm60℃，两步法，什么办法提高扩增效率
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