① 非特异性扩增：当PCR反应条件不够好或引物与非目的基因序列匹配时，可能会导致非特异性扩增产物的形成。这种情况下，熔解曲线可能显示出多个峰。可通过优化PCR反应条件（进行温度梯度PCR实验，尝试不同温度和延伸时间）、根据引物设计原则来设计新的引物等方法以增加特异性。② 引物二聚体：引物对之间的非特异性结合...
② 定量PCR仪在不同位置温度不一样:为获取准确的实验结果,定量PCR仪应定期进行校准。 ③ qRT-PCR预混液未混合均匀:可以轻轻颠倒装有qRT-PCR预混液的离心管来促进混合。注意应避免剧烈摇动或振荡,以免引起气泡的形成。 以上提供的是qRT-PCR相对定量分析的详细步骤以及常见问题和解决方案,希望能对小伙伴们有所...
② 定量PCR仪在不同位置温度不一样:为获取准确的实验结果,定量PCR仪应定期进行校准。 ③ qRT-PCR预混液未混合均匀:可以轻轻颠倒装有qRT-PCR预混液的离心管来促进混合。注意应避免剧烈摇动或振荡,以免引起气泡的形成。 以上提供的是qRT-PCR相对定量分析的详细步骤以及常见问题和解决方案,希望能对小伙伴们有所帮助!
做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算; qRT-PCR原...
通常,在科学实验中,我们会对所研究的目的基因进行表达分析,常用的方法有实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)。有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题和解决方...
一、qRT-PCR定量原理 qRT-PCR，即实时荧光定量PCR，就是通过对PCR扩增反应每一个循环产物荧光信号的实时...
3万 110 4:26 App 实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验qpcr和上机测试的过程解析 5671 7 6:44 App 实时PCR动画演示 4.4万 23 3:02 App 实时定量荧光PCR(Real-time PCR) 39.1万 539 15:25 App 实验员小哈&实验系列 - 第十集 - RT-PCR (qPCR) 2.9万 142 4:58 App 【荧光定量PCR(qPCR)】实验...
分析Real-time PCR数据的方法可以分为绝对定量和相对定量。 绝对定量(Absolute Quantification,AQ)是为了计算在未知样本中,某个核酸序列的实际拷贝数量,这样计算需要先制作标准曲线,找到荧光强度和产物数量的线性关系。 相对定量(Relative Quantification,RQ)是测定在测试样本...
【题目】qRT-PCR又称实时荧光定量PCR,是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,间接对待测样品中特定DNA序列进行定量分析的方法。qRT-PCR实验步骤:反转录→扩增→检测。qRT-PCR目前主要应用于基因表达水平的检测。请回答下列有关问题:(1)反转录:在_酶的作用下,mRNA反...
配置qRT-PCR反应体系:加入引物等。 扩增反应:设置合适的程序,上机进行扩增。📊数据分析: 软件选择:使用合适的软件(如Bio-Rad CFX Manager等)。 Ct值分析:通过相对定量(如2⁻ΔΔCt法)计算基因表达差异。📚最后,为大家整理了qPCR等细胞实验的手册合集,免费分享!💪0...