qRT-PCR的原理：以基因的cDNA为模板进行PCR扩增，在PCR扩增过程中，荧光信号的强度与扩增产物的数量成正比。通过实时检测PCR扩增过程中荧光信号的变化，可以获得关于相对定量基因表达水平的信息。qRT-PCR一般包括SYBR染料法和Taqman探针法。例如，SYBR染料游离时发出的荧光信号微乎其微，但当其与双链DNA的小沟结合后，荧...
此步骤完成后可将 cDNA 冻存于-80℃ 以备用。4、qRT-PCR 反应：设计并合成引物，随后以 cDNA 为模板，使用细胞炎性因子的特异性引物进行 qRT-PCR 扩增反应。反应完成后，确认扩增曲线和融解曲线，对标准曲线进行分析。5、数据分析：使用 qRT-PCR 仪检测荧光信号，导出 Ct 值，以β-actin 作为内参基因，采用 2...
(1)概念:PCR全称为聚合酶链式反应,是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。 (2)原理:DNA复制。 (3)前提条件:要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一对引物。 (4)条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。 (5)过程:①高温变性:DNA解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋...
方差分析，T检验均是对比差异性的方法。对于T检验的X来讲，其只能为2个类别比如男和女。如果X为3个...
lncRNA:和mRNA的步骤一致。 miRNA:茎环法原理:由于miRNA全部为23nt左右的短序列,无法进行直接PCR检测,所以使用了茎环序列这个工具,茎环序列是一段50nt左右单链DNA,可以自身形成发卡结构,3’末端可以设计成与miRNA部分片段互补的序列,那么在反转录时就可以将目的miRNA连接到茎环序列上,那么总长度就达到70bp,就符合qP...
qrtpcr的原理呢,其实就是利用特定的引物和探针,去找到我们想要检测的那个基因片段,就好像是在茫茫人海中精准地找到那个对的人一样。 那qrtpcr的步骤是咋样的呢?首先得准备好各种试剂和样本,这就像是要开始一场冒险,得先把装备都准备齐全咯。然后把样本和试剂混合在一起,放进那个神奇的仪器里,让它们在里面发生...
🔬 原理:qPCR技术通过特异性引物扩增目标DNA序列,并利用荧光探针或SYBR Green I荧光染料法检测PCR产物的数量,从而定量分析样品中目标序列的数量。这种方法快速、准确、高灵敏且高特异性。 📚 用途:广泛应用于基因表达分析、突变检测、病原体检测等领域。 🧪 材料与仪器: 试剂:RNA提取试剂盒、反转录试剂、qRT-PC...
RT-qPCR的原理涉及两个主要步骤:逆转录和PCR扩增。 逆转录是将RNA通过酶的作用,转录成DNA的过程。首先,逆转录酶(RT酶)会结合到RNA模板的3'末端,并合成一条与RNA互补的单链DNA(cDNA)。这个过程称为逆转录。RT酶需要一个引物,称为逆转录引物或随机引物,用于提供链延伸的起始序列。此外,RT过程还需要逆转录缓冲液...
4.9万 27 13:34 App RT-qPCR详细步骤 6781 -- 1:12 App 荧光定量 PCR 原理 1.8万 -- 2:12 App 手把手教你做实验_RNA提取(准备工作) 1.5万 3 1:01 App 荧光定量PCR(SYBR/RT-qPCR) cDNA稀释方法 2.2万 13 14:01 App 【科学可视化】Biorad伯乐荧光定量PCR仪 数据分析处理 1.2万 6 9:10 ...