实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR,Quantitative Polymerase Chain Reaction)是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号的实时监测,实现对DNA模板定量分析的技术。下面是qPCR的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。 一、qPCR的原理 qPCR的原理是在普通PCR反应体系中...
(3) PCR 扩增:以合成的 cDNA 为模板进行 PCR 或 qPCR 实验。(RT-qPCR 分一步法 RT-qPCR 和两步法 RT-qPCR 两种)。 (4) 产物分析:通过琼脂糖凝胶电泳 (RT-PCR) 或荧光信号 (RT-qPCR) 分析扩增效果。 此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术,逆转录定量实时 PCR (Reverse transcription quantitative...
(1) 准备反应体系:提取 RNA,加入逆转录酶(常用的逆转录酶有 M-MLV 逆转录酶和 AMV 逆转录酶)、引物(通常使用随机引物,oligo (dT)引物或基因特异性引物)、dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、反转录缓冲液(提供合适的 pH 和离子强度)、RNase 抑制剂(防止 RNA 在反应过程中降解)、去离子水等。也可直接使用RT-...
从研究生入学的那一刻起,我们就开始了漫长的科研实验之旅,养细胞、养老鼠、提取蛋白、跑WB、做流式细胞术等各种常用实验,逐渐成为我们的日常。 然而,每当实验遇到困难或不顺时,导师总是让我们自己看protocol,可是实验室里每个人的课题...
大纲:首先是收集细胞或者研磨碎的组织,加入trizol提取RNA,然后逆转成cDNA,之后是跑q。 (1)收集样本: 细胞:可以将贴壁细胞胰酶消化之后离心或者悬浮细胞收集起来离心,或者直接用细胞刮或者枪头刮下来,或者直接将细胞拿到生物安全柜不用无菌操作,主要是防止吸入trizol,有毒),弃掉培养基(或者把培养基收到-20,用于后续...
最全的生物实验protocol与生物实验操作视频学习资料(细胞功能分析、蛋白组学、病例组化、分子生物学)112个科研软件免费版(数据处理+绘图+翻译+生物实验相关等) 下载链接:pan.quark.cn/s/34a75dd2 一、PCR原理和历史 PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,定性扩增双链DNA。 PCR(Polymerase Chain...
步骤: 引物设计,primer design; 分离RNA,RNA isolation; 反转录,RT phase; 定量,qPCR phase; 所用试剂和耗材: RNeasy Plus Micro Kit (50) RT Master Mix Kit Power SYBR™ Master Mix Protocol:RT-qPCR.docx Dropbox 参考: RNeasy Mini Kit 抽提试剂盒的使用小Tips ...
荧光定量PCR实验Protocol 标记适当数量、兼容待用 PCR 仪型号的 PCR 管或 PCR 板。PCR 反应应当包括靶蛋白抗体Anti-target IP样品、阴性对照 Normal Mouse/Rabbit IgG样品、监控 DNA 污染的不含 DNA 模板的空白对照和1% 输入对照Input组染色质 DNA 的连续稀释物(未稀释、1:5、1:25、1:125),以生成标准曲线并...
1. The protocol uses TaqMan®probes in a SNP genotyping assay on ABI real-time instruments or a standard thermal cycler. Note the separate cycling conditions for the ABI 7500 in Fast Mode, and the lower amount of ROX Reference Dye required for the ABI 7500 and 7500 Fast systems. This ge...
大纲：首先，收集细胞或研磨组织样本，使用trizol提取RNA，然后逆转录成cDNA，进行实时荧光定量PCR（RT-qPCR）。（1）收集样本：细胞：将贴壁细胞用胰酶消化后离心，或直接刮取悬浮细胞离心，确保在收集过程中避免吸入trizol，以防止吸入有毒物质。用生理盐水或1×PBS轻轻洗涤细胞两遍，然后加入trizol，每3....