实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR,Quantitative Polymerase Chain Reaction)是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号的实时监测,实现对DNA模板定量分析的技术。下面是qPCR的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。 一、qPCR的原理 qPCR的原理是在普通PCR反应体系中...
General Protocol The following protocol uses TaqMan® probes in a SNP genotyping assay on ABI real-time instruments or a standard thermal cycler. Note the separate cycling conditions for the ABI 7500 in Fast Mode, and the lower amount of ROX Reference Dye...
(RT-qPCR 分一步法 RT-qPCR 和两步法 RT-qPCR 两种)。 (4) 产物分析:通过琼脂糖凝胶电泳(RT-PCR)或荧光信号(RT-qPCR)分析扩增效果。 此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术,逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative real-time PCR, RT-qPCR)。通过在 qPCR 反应中使用 cDNA 来测量 RNA...
这时,如果一定要做阳性对照,还可以采用另一个方案,使用阳性抗体histone H3抗体配合靶基因的特异性引物来做PCR,因为任何靶基因都有组蛋白的结合,所以histone H3抗体免疫沉淀下来的DNA用靶基因引物做PCR也肯定会产生阳性信号。 使用者针对目的DNA 设计适宜的特异性引物至关重要。 常规PCR实验Protocol 根据待分析样品的数量...
然而,每当实验遇到困难或不顺时,导师总是让我们自己看protocol,可是实验室里每个人的课题方向都不同,根本没有统一的protocol,网上的资料也零零碎碎,根本找不到系统、完整的参考资料。 为了帮助更多的科研新人少走弯路,解螺旋特为大家带来...
大纲:首先是收集细胞或者研磨碎的组织,加入trizol提取RNA,然后逆转成cDNA,之后是跑q。 (1)收集样本: 细胞:可以将贴壁细胞胰酶消化之后离心或者悬浮细胞收集起来离心,或者直接用细胞刮或者枪头刮下来,或者直接将细胞拿到生物安全柜不用无菌操作,主要是防止吸入trizol,有毒),弃掉培养基(或者把培养基收到-20,用于后续...
一、Bio-protocol 优势:支持中文,protocol 很多都是中文的,非常好用。 缺点:暂无 领域:基础实验操作(WB, RT-qPCR, IF, FCM……)、动物实验(动物饲养、采样等…….)、细胞培养(原代、细胞系相关培养) 图片来源:网页截图 网页几乎全中文且免费浏览,可以直接输入中文进行检索,并且搜索到的结果都是中文的。
从基础到进阶:PCR、qPCR 和 RT-PCR 不是一回事儿?(内含 Protocol) Nature 常客?一文弄懂 LNP,冲冲冲~(内附制备 Protocol) 实验操作 | 表观遗传学: 染色质免疫沉淀 (ChIP) 检测知多少? 免疫细胞化学/免疫荧光 (ICC/IF) 实验操作全流程! 一看就懂噻~上...
The following protocol uses TaqMan® probes in a SNP genotyping assay on ABI real-time instruments or a standard thermal cycler. Note the separate cycling conditions for the ABI 7500 in Fast Mode, and the lower amount of ROX Reference Dye required for ...
步骤: 引物设计,primer design; 分离RNA,RNA isolation; 反转录,RT phase; 定量,qPCR phase; 所用试剂和耗材: RNeasy Plus Micro Kit (50) RT Master Mix Kit Power SYBR™ Master Mix Protocol:RT-qPCR.docx Dropbox 参考: RNeasy Mini Kit 抽提试剂盒的使用小Tips ...