尤其是非洲猪瘟和新冠发生后,qPCR检测得到了极大的普及,对于刚刚进入qPCR检测领域的人,很容易钻入了“唯Ct值”的牛角尖,今天我们就聊聊qPCR中的Ct值。 一、Ct值的基本概念 1、什么是Ct值 阈值循环数 Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值,荧光信号大于荧光阈值时PCR循环数。仪器软件通常将第3-15个循环的荧光值设为...
Cq 值代表着 PCR 反应的阈值。Cq 值越低，说明模板开始翻倍的时间越早，即样本中的目标基因含量越高。
什么是Cq值?Real-time PCR (或qPCR)通常用于量化目标序列的绝对量或比较样本之间目标序列的相对量。该技术通过实时监测在扩增放大过程中目标特异性荧光信号的变化来展示扩增情况。虽然qPCR的荧光染料和探针是序列特异性的,但是大多数qPCR实验中都会出现相当多的背景荧光值。想要获得具有实际意义的目标序列真实情况,就需要...
这样,C q 值通常在实时 PCR 中的重复之间保持一致。当达到 PCR 反应终点时,积累的抑制剂、失活的聚合酶和限制性试剂会在终点值上产生很多变化,这就是传统 PCR 无法定量使用的原因。 影响Cq值的相关因素有哪些? 许多因素会影响您的 C q 值。 您的样品之间C q 值的一些差异将是由于生物事件,例如您的目标基...
这里指的是大部分的qPCR试剂盒的循环数为40个或45个,我们能否在不改变试剂盒的设计的前提下,仅通过将40个循环增加到45个循环,或是将临界值由38提高到40,或者由40提高到45的方式来提高试剂盒的敏感性呢? 4.1 从原理上解释 理论上,假设初始模板量为1个拷贝,酶的扩增效率100%,到达最大阈值约需要35个循环,因此...
QPCR实验中，若无模板加入却产生了Cq值，首先需检查退火温度是否充足，循环次数是否足够。排除操作失误后，问题可能源于引物二聚体或污染。进行以下步骤以排查问题：设计实验：分别使用引物与cDNA，不添加cDNA的引物组，以及内参与cDNA，进行普通PCR实验，并对产物进行电泳验证。内参验证操作正确性：若内参实验...
Cq 值:qPCR 扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数,与起始浓度的对数成线性关系。分析定量时一般取 Cq:15～35,太大或者太小都会导致定量的不准确。 图3:扩增曲线 熔解曲线:判断扩增的特异性,理想的熔解曲线具有锐利的单峰,证明 qPC...
4. 异常样品：某些样品可能会存在抑制或者干扰因子，这可能会导致qPCR无法正确读取Cq值。这些抑制或干扰...
3.1 Cq 值出现较晚,明显偏大(> 35) 1)模板量低或基因表达丰度低:建议增加模板量观察 Ct 值,观察其能否成相应倍数减少。 2)模板降解:重新制备扩增模板,重复实验。 3)qPCR 方法未优化或验证:整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低,建议通过标准曲线确认扩增效率。