1、先来了解一下什么是Ct值?阈值循环数Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值,荧光信号达到荧光阈值时PCR循环数。仪器软件通常将第3-15个循环的荧光值设为基线(baseline)。阈值(threshold)一般是基线的标准偏差的10倍。模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在一定线性关系,起始模板量浓度越高,Ct值越小;起始模板量...
1.1万 1 10:04 App 如何快速分析PCR结果实验数据 2684 -- 27:27 App qPCR的Ct值(Cq值)的分析 4439 -- 12:49 App qPCR数据处理、Prism作图及导出到AI;如何让对照表达量平均值等于1但是反映不同样本的差异性 8.8万 76 17:21 App 感动哭II终于有人把QPCR实验一次性说清楚了 1368 -- 3:23 App 动...
22.7万 88 5:38 App qPCR数据处理及分析作图 960 -- 3:01 App QPCR数据处理-数据导出 1236 -- 6:16 App qPCR原始数据处理模板-Excel(自用) 26.1万 262 26:40 App qPCR数据处理分析及作图(GraphPad Prism) 2682 -- 27:27 App qPCR的Ct值(Cq值)的分析 8.8万 76 17:21 App 感动哭II终于有...
二、计算步骤 算出复孔平均值,即每个样本的Cq(Bax)、Cq(36B4) 计算每个样本的▲Cq,▲Cq=Cq(Bax)-Cq(36B4) 算出Control组所有▲Cq的平均值,记为average ▲Cq of Control 计算每个样本的▲▲Cq,▲▲Cq=▲Cq- average ▲Cq of Control,得到▲▲Cq (相当与以Control组作为基准) 计算foldchange=2^(-▲...
qPCR数据处理方法为△△Ct法原理 【△△Ct法原理】其特点是只依靠Ct值来计算结果，因此跑完qPCR之后的结果中除了Ct值外，其他数据几乎在后续分析和计算中是用不到的。但前提是目的基因和内参基因的扩增效率应基本一致。1、先来了解一下什么是Ct值？阈值循环数Thresholdcycle(Ct)也写作Cq值，荧光信号...
引物扩增效率的要求: 引物扩增效率在90-110%之间; 标准曲线R2>0.98; Ct值的标准偏差应<0.2; 几点注意事项: 常说的Ct值=Cq值; 无论内参基因还是目的基因,Ct值推荐在15-35之间,超过35时重复性就会很差; 配置的混合mix(定量SYBR mix,水,引物等)不得二次使用; 可以PCR产物作为标准品,10μL稀释到100μL; ...
3.3 数据处理及统计分析 (1)qPCR结束,得到原始数据,粘贴到Excel表格中,仅保留位置及Cq值(注:Ct值与Cq值表达的意思基本一致,实验指南建议用Cq值来命名,所以不必纠结两者的名称,同等看待即可;此外,一定要明确自己的加样位置,以防分析出错); (2)我们一般在实验中会设置复孔,所以第一步先求其平均值; ...
常说的Ct值=Cq值; 无论内参基因还是目的基因,Ct值推荐在15-35之间,超过35时重复性就会很差; 配置的混合mix(定量SYBR mix,水,引物等)不得二次使用; 可以PCR产物作为标准品,10μL稀释到100μL; 模板量应避免小于3μL,可计算合适浓度每个体系按5μL量加模板; ...
想搞定qPCR数据分析?必须了解这几个参数! qPCR实验的成功与否,关键在于各组数据是否达到判定标准以及是否符合实验预期,小小的qPCR实验它可以变得很简单,也可以变得很复杂,如何抓住qPCR数据分析的关键,是分析qPCR结果可信度的第 - 测试狗-GO小秘于20230926发布在抖音
问题(3):异常形状的放大;不可重复的数据;晚于预期的 Cq 值 原因:(1)PCR反应效率低(2)引物Tms的差异>5°C产生不等的延伸(3)退火温度过低(4)靶序列中意想不到的突变(5)模板材料含有抑制剂。 解决办法:(1)优化引物浓度和退火温度(2)将引物重新设计到靶序列的不同区域(3)退火温度比引物熔点低2-5°C(4...