融解曲线是PCR反应结束后,将反应液的温度逐渐升高,实时监测荧光染料的荧光信号轻度变化进行的。升温前PCR产物成双链结构,具有较高的荧光强度信号,当逐渐升高温度的同时,DNA双链逐渐打开,双链中嵌入的染料减少,随之荧光信号也逐渐降低,当双链DNA解链一半时,荧光信号急剧下降,此时的温度即为融解温度(Tm)。Tm值与PCR扩...
qPCR实验反应结束后进行的融解曲线分析是什么?有什么用?使用染料法分析的qPCR扩增反应结束后,通过升温至95度,同时收集这个过程中管内荧光数值的变化,以此分析管内产物的特异性。理论上,反应扩增结束后,管内已经有大量的目标产物,这些都是双链DNA,而反应体系内的染料SYBR Green会嵌在DNA双链的小沟内,当温度逐渐升高...
qPCR融解曲线的峰高由什么决定 Tm值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受。融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数。...阅读全文 如何作QPCR的标准曲线 作QPCR的标准曲线可以用PCR-ELISA法作。具体如下:PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素...
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