qPCR数据处理是实现定量分析的关键步骤,本文将介绍qPCR数据处理的原理和方法。 一、qPCR数据采集 在进行qPCR实验时,首先需要选取合适的引物和探针,设计合适的扩增方案。然后,在实验仪器中加入待测样品和试剂,进行PCR反应。在PCR反应过程中,荧光信号随着扩增产物的累积而增加,实时监测荧光信号可以得到扩增曲线。 二、数据...
很简单,对上面推导得到的所有样本和control组的2^(-△Ct),均除以control组的2^(-△Ct),即可得到2^(-△△Ct);好,到这里,就明白了qPCR数据分析中△△Ct法的计算原理及推导过程。【实验设计】假设需要研究光照时间对小麦LIGHT基因表达的影响,以光照0小时的小麦植株作为control组,以分别持续光照4、12、24、48、9...
实时荧光定量PCR原理 扩增曲线 在Real-time qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。 荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化...
定量数据处理方法的讨论，我们聚焦于△△Ct法这一广泛应用于qPCR数据处理的原理。△△Ct法的关键在于Ct值，它表示荧光信号达到阈值时的循环数，通常在第3-15个循环间设定基线，并据此计算模板起始拷贝数的对数关系。模板的Ct值越小，起始拷贝数越高；反之，Ct值越大，起始拷贝数越低。PCR循环在Ct值对...
qPCR的疑难杂问解答 ③数据标准化: 为了消除实验中不同样本间潜在的差异,如DNA浓度和PCR效率等,需要进行标准化处理。一种常见的方法是使用管家基因(housekeeping gene)进行标准化,因为这些基因在所有样本中表达稳定。标准化步骤是数据处理的关键环节,能显著提高数据分析的准确性和可靠性。
【△△Ct法原理】这里我们只介绍△△Ct法,其特点是只依靠Ct值来计算结果,因此跑完qPCR之后的结果中除了Ct值外,其他数据几乎在后续分析和计算中是用不到的。但前提是目的基因和内参基因的扩增效率应基本一致。1、先来了解一下什么是Ct值?阈值循环数 Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值,荧光信号达到荧光阈值时PCR循...
实时荧光定量PCR原理 扩增曲线 在Real-time qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。 荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化...
实时荧光定量PCR原理 扩增曲线 在Real-time qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。 荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化...
实时荧光定量PCR原理 扩增曲线 在Real-time qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。 荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化...